钟健生 张金丽 张星 于晓阳 佃林萍

白血病是一种造血干细胞出现病变的恶性肿瘤,儿童和青少年人群多见［1］。临床治疗常以放疗、化疗、免疫治疗、靶向治疗以及骨髓移植等为主,预后和生存率均有了很大提升,但是仍有患者产生多药耐药性［2］。而腺苷三磷酸(ATP)结合盒式蛋白(ABC) 超家族在多药耐药的形成过程当中扮演着重要的角色,如ABCB1,是位于第7号染色体上由ABCB1基因所编码的糖蛋白。研究证实,ABCB1在耐药白血病细胞中存在过表达。Ceritinib是美国食品药品监督管理局(FDA)批准用于治疗非小细胞肺癌的选择性第二代间变性淋巴瘤激酶(ALK)抑制剂［3］。研究提示［4］,Ceritinib对多药耐药ABCB1表达的实体肿瘤细胞体内体外都有很好的逆转耐药活性。本研究拟通过动物实验、细胞株及体外实验观察Ceritinib是否增强ABCB1过表达白血病细胞化疗药物的疗效,现报告如下。

1 材料与方法

1.1材料 主要材料包括阿霉素、紫杉醇、顺铂、维拉帕米、四甲基偶氮唑蓝(MTT)、二甲基亚砜(DMSO)(美国Sigma company)；Ceritinib(美国Selleck Chemical公司)；细胞株：K562/adr细胞,K562细胞；北京维通利华公司培养5～6周龄的BALA/c-nu雌性裸鼠；流式细胞仪(美国Beckman Coulter公司)、酶标仪(Model 550)(美国Bio-Rad公司)、Forma 3Ⅲ CO2水套培养箱(美国Thermo公司)等。

1.2方法

1.2.1四甲基偶氮唑蓝(MTT法)检测细胞毒性 不同浓度化疗药物加或不加Ceritinib、维拉帕米。5%CO237℃孵育细胞68 h,每孔加入MTT,4 h后离心,移除培养基,加入DMSO。酶标仪检测光密度540 nm,底物670 nm。计算底物IC50值和多药耐药逆转倍数。重复3次。

1.2.2体内实验 收集约1×107K562/adr细胞,皮下植入至5～6周裸鼠腋下。肿瘤直径达0.5 cm时随机分四组处理：生理盐水组(4 ml每2天1次灌胃,12 d)；……