汤良君，孙艳，张晓红，盛少琴

0 引言

宫颈癌是全球常见的妇科恶性肿瘤之一，近年来发病率逐渐升高，且呈年轻化趋势发展[1]。目前，手术前后辅助化疗被认为是治疗宫颈癌有效的治疗方法之一，顺铂作为化疗的常用药物，在宫颈癌新辅助化疗方案中作为基础药物被广泛应用，然而，顺铂具有的肾、耳、血液、胃肠道等不良反应限制了化疗效果[2-3]。因此，寻找可增强宫颈癌顺铂敏感度的基因靶点药物，对降低顺铂用量、减轻不良反应具有重要的应用价值。微小RNA（microRNA,miRNA）是一类小分子非编码单链RNA，通过从转录后水平调控靶基因表达，广泛参与细胞的生长、分化、增殖、凋亡等过程[4]。研究发现，肾癌、乳腺癌等多种类型癌细胞的化疗敏感度均与miR-148a表达相关[5-6]，但miR-148a与宫颈癌顺铂耐药的关系尚不明确。信号转导和转录激活因子3（signal transducer and activator of transcription 3,STAT3）参与宫颈癌的发生发展，抑制STAT3通路可提高宫颈癌顺铂敏感度[7]。miRTarBase数据库预测发现，STAT3是miR-148a的潜在靶点，其靶向关系在非小细胞肺癌中已有研究，但在宫颈癌中尚无定论[8]。HeLa细胞是宫颈癌细胞中最为稳定且增殖迅速的细胞系，故本研究将通过调控miR-148a表达，探讨miR-148a靶向STAT3对宫颈癌HeLa细胞顺铂化疗敏感度的影响。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器

人HeLa细胞（货号：HZ-H496）购自美国ATCC细胞库；胎牛血清（货号：0025）购自美国ScienCell公司；顺铂（货号：D8810）购自北京索莱宝科技有限公司；DMEM培养基（货号：KL-P0032）购自德国Merck/Sigma公司；Lipofectamine 2000转染试剂（货号：11668019）购自美国Invitrogen公司；实时荧光定量PCR（qRTPCR）试剂盒（货号：K1002S）、pGL3-basic vector（货号：E1751）购自美国Promega公司；miR-control、miR-148a mimic、nonsense inhibitor、miR-148a inhibitor及miR-148a、STAT3、U6、β-actin引物均由生工生物工程（上海）股份有限公司设计合成；……