刘宪，张燕茹,2，陈茜，冯倩,2，王海燕，崔南

0 引言

在全球范围内，宫颈癌是仅次于乳腺癌、结直肠癌和肺癌的女性第四种常见肿瘤类型，严重威胁女性的健康和生命[1]。Slug又称为Snai2（snail family transcriptional repressor 2,Snail家族转录抑制因子2）,是Snail锌指转录因子家族的一员，在细胞上皮-间充质转换（EMT）过程中发挥重要作用。目前的研究表明Slug可以促进多种类型肿瘤细胞的上皮-间充质转换过程，并兼具促进或抑制肿瘤细胞增殖的双重作用[2]。我们前期的研究发现，在宫颈癌细胞中，Slug可以降低Wnt/β-catenin信号转导通路活性，显著下调CDH3在宫颈癌细胞系SiHa中的表达[3]。CDH3又称为P-cadherin（cadherin 3,钙黏蛋白3），是钙黏蛋白家族的一员。CDH3通过调节Wnt/β-catenin信号转导通路的活性，参与肿瘤细胞的增殖及肿瘤的生长[4]。但在宫颈癌中，关于Slug能否调节CDH3表达及Slug通过CDH3如何调节wnt/β-catenin信号转导通路活性的研究仍不多见。本研究通过检测Slug对CDH3启动子区的转录调节作用，探讨Slug通过转录抑制CDH3表达下调β-catenin和C-myc在SiHa细胞中的表达从而抑制细胞增殖的分子机制。

1 材料与方法

1.1 材料

宫颈癌细胞系SiHa和HeLa购自美国ATCC公司。CDH3表达载体3FLAG-SV40-EGFP-IRER购于上海吉凯基因公司，质粒表达载体pCAG-IRES2-AcVEC-neo由本实验室保存。DMEM培养基购于上海源培生物科技有限公司，胎牛血清购于以色列Biological Industries公司，Slug蛋白抗体购于美国Cell Signaling Technology公司，CDH3、β-catenin、C-myc和GAPDH蛋白抗体均购于美国Santa Cruz公司，染色质免疫共沉淀试剂盒购于美国Millipore公司，双荧光素酶报告基因检测试剂盒购于美国Promega公司，其余试剂为国产分析纯。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养 人宫颈癌细胞SiHa和HeLa培养于含10%胎牛血清的DMEM培养基中，置于5%CO2的37℃培养箱中进行常规培养。……