于婷 孙楠 孙晶 黄杰 曲守方

杜氏肌营养不良（Duchenne muscular dystrophy，DMD）是由肌营养不良蛋白（dystrophin）基因突变所致的X-连锁隐性遗传病，是一种严重的、致死性神经肌肉疾病［1-3］。DMD患者多在20 多岁死于呼吸衰竭或心力衰竭［4］，迄今为止尚无治愈的方法。因此，对DMD患者及携带者行基因诊断，以及高风险胎儿行产前诊断［5］，显得格外重要。目前DMD基因突变检测试剂盒均未取得医疗器械注册证，多在第三方检测机构使用或者仅用于科研。多家公司正在开展DMD检测试剂盒医疗器械注册证的申报，以便合法合规进入医院。建立DMD基因突变检测国家参考品可为这类试剂盒性能评价提供客观有效的评价手段。2019 起中国食品药品检定研究院（下称本院）开展了DMD基因突变检测国家参考品的研制工作。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 样本

外周血样来自中山大学附属第一医院、武汉康圣达医学检验所、广州市妇女儿童医疗中心。本研究的临床基本信息收集和临床血样的采集均获得了医院伦理委员会批准，以及患儿或家属的知情同意，签署了知情同意书。

1.2 试剂

多重连接依赖性探针扩增技术（MLPA）检测试剂盒（苏州贝康），SALSA MLPA 检测试剂（MRCHolland）；二代测序法（next generation sequencing，NGS）检测试剂盒：①半导体测序法：苏州贝康、东莞博奥木华；②可逆末端终止测序法：北京贝瑞和康、迈基诺、亚能（深圳）、欧蒙未一；③靶向测序法：成都纳海；④联合探针锚定聚合测序法：天津华大。

1.3 检测仪器

ABI 3730XL、ABI SeqStudio 及ABI 3730X 基因分析仪（赛默飞）；DA8600 Ion Proton 高通量测序仪（达安基因），NovaSeq 6000 基因测序仪及Miseq 基因测序仪（美国，Illumina 公司），BioelectronSeq 4000 基因测序仪（博奥生物），MGISEQ-2000 PE100 基因测序仪（华大智造）。……