周梦，史熊杰

（武汉大学 生命科学学院，湖北武汉 430072）

在真核生物中，细胞内部被严格地组织成分门别类的细胞器[1]，它们各自拥有特殊的结构特征以及动态特性，发挥着不同的生物学功能。为了研究某一特定细胞器的微观结构、生化组成以及特定的功能，需要将其从细胞中分离纯化出来。在这个过程中，要求纯化的细胞器结构完整、形态与细胞内无异、具有生物学活性，在数量足够基础上，提高纯度、节省时间、提高效率、节约经济成本。如在蛋白质组学的研究中，需要分离纯化出纯度较高的细胞器，以满足电泳或色谱分离要求，从而建立相应的细胞器蛋白质组数据库[2]。因此，针对分离的目的和后期鉴定要求，选择合适细胞破碎溶剂、破碎方法以及分离纯化方式对于纯化的细胞器至关重要。细胞器分离纯化方法分为离心分离、亲和免疫纯化分离、自由流电泳分离、荧光激活细胞器分选、光学镊子和激光捕获显微解剖、双向电泳分离等[3]，本文主要介绍离心和亲和纯化两种分离方法，对这两种分离纯化方法的原理、操作步骤以及特点讨论分析。

1 细胞器的释放

理想的匀浆是成功分离纯化细胞器的第一步，即细胞器等细胞成分能完整、均一地分布在匀浆液中[4]。在匀浆过程中，经常观察到细胞质聚集体，这是因为细胞破碎不充分或不当，细胞器与围绕在细胞核周围的细胞骨架元素相联系，或被困在大的聚集物中，形成大的细胞沉积团块。……