胡溢博

作者单位：郑州大学第二附属医院检验科，河南郑州450003

自身免疫性肝炎（autoimmune hepatitis，AIH）是由自身免疫介导的慢性进行性免疫疾病，主要以肝细胞损害和肝细胞炎症指标升高为主要临床特征，严重者可快速进展为肝硬化和肝衰竭。遗传易感性曾被认为是其主要发病因素，而其他因素如环境、免疫系统、药物、病毒感染等可能是在此基础上引起机体免疫耐受机制破坏，产生肝脏自身抗原的免疫反应，从而破坏肝细胞导致肝脏炎症。目前认为主要是个体自身免疫紊乱，促使炎症因子浸润使肝细胞损伤，但具体促炎因子目前尚不明确。趋化素是G蛋白偶联受体人趋化因子受体1的配体，具有趋化作用，主要参与机体的炎症反应，其可通过结合受体趋化素-R进而趋化炎性细胞，进而参与机体炎性反应。研究表明趋化素与免疫炎症反应密切相关，但目前对AIH发病过程是否与血浆趋化素存在相关性的研究尚未报道，因此本研究分析和探讨趋化素与AIH的关系，为AIH的早期诊断及寻找可靠的诊断标志物提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2017年10月至2018年10月郑州大学第二附属医院就诊的AIH病人68例，男31例，女37例，年龄（55±10）岁，范围为44～70岁；同期收集该院70例进行健康体检的志愿者，男35例，女35例，年龄（55±9）岁，范围为45～70岁；同期收集该院酒精性肝病（alcoholic liver disease，ALD）病人63例为ALD组，男34例，女29例；年龄（57±10）岁，范围为41～72岁。三组性别（

χ

=

8.000，

P

=0.092）、年龄（

F

=0.984，

P

=0.376），具有可比性。诊断标准：参照2011年中国《自身免疫性肝病诊断和治疗指南》和《自身免疫性肝炎诊断和治疗共识（2015）》及2003年中华医学会肝脏病学会酒精性肝病学组制定的《酒精性肝病诊断标准》。AIH病人纳入标准：（1）经B超或CT检查后，证实存在脂肪肝；（2）无饮酒史；（3）自愿签署知情同意书。排除标准：（1）伴有其他感染性疾病；（2）病原学检测甲型肝炎病毒-免疫球蛋白、丙型肝炎病毒、丁型肝炎病毒、戊型肝炎病毒或抗输血相关病毒阳性者；（3）酒精性或中毒性肝病等。ALD病人纳入标准：（1）5年以上饮酒史；（2）平均饮酒量＞40 g/d；（3）自愿参加。排除标准：（1）病毒感染；（2）合并肝损伤；（3）B超有弥漫性肝病表现等。本研究符合《世界医学协会赫尔辛基宣言》相关要求。

1.2 方法

采集所有研究对象同一时间段外周静脉血5 mL，经乙二胺四乙酸抗凝，对外周血单个核细胞采用梯度离心法进行分离，利用单克隆抗体对Th1、Th2、Th17和调节性T细胞（regulatory T-cell，Treg）进行细胞内染色，并采用流式细胞仪进行检测。采用酶联免疫吸附测定对血清干扰素γ、白细胞介 素-4（interleukin-4，IL-4）、转 化生长因子β（transformimng growth factor，TGF-β）、白细胞介素-17（interleukin-17，IL-17）和脂肪因子趋化素进行检测，操作步骤严格按照试剂盒说明书进行。

2 结果

2.1 三组血清趋化素水平比较

对照组、ALD组和AIH组 血 清 趋 化 素 水 平 依 次 为（73.88±21.69）mmHg、（89.57±23.58）mmHg、（122.69±31.86）mmHg（

F

=48.463，

P

＜0.001）。与对照组相比，ALD组、AIH组病人血清趋化素水平均明显升高（

P

＜0.05）；与ALD组比较，AIH组病人血清趋化素水平明显升高（

P

＜0.05）。

2.2 CD4T细胞亚群及血清细胞因子表达水平比较

与对照组比较，AIH组、ALD组病人Th1、Th17细胞比例及血清干扰素γ和IL-17表达水平均明显升高（

P

＜0.05），Th2、Treg细胞比例均明显降低（

P

＜0.05）；与ALD组病人比较，AIH组病人Th1、Th17细胞比例及血清干扰素γ和IL-17表达水平均明显升高（

P

＜0.05），Th2、Treg细胞比例均明显降低（

P

＜0.05）。三组IL-4、TGF-β表达水平比较差异无统计学意义（

P

＞0.05），见表1，2。

表1 三组外周血CD4+T细胞亚群水平比较/（%，±s）

2.3 血清趋化素与CD4T细胞亚群及血清细胞因子相关性

Pearson分析结果显示，血清趋化素与Th1、Th17、干扰素γ、IL-17均呈正相关（

P

＜0.05），与Th2、Treg细胞比例呈负相关（

P

＜0.05），见表3。

表3 血清趋化素与CD4+T细胞亚群及血清细胞因子相关性

表2 三组外周血细胞因子检测水平比较/（ng/L，±s）

2.4 AIH的多因素logistic回归分析

以是否发生AIH为因变量，因Th1、Th17、干扰素γ、IL-17、Th2、Treg、趋化素等单因素分析中差异有统计学意义的指标为自变量进行多因素logistic回归分析显示，Th1、Th17、干扰素γ、趋化素是影响AIH的危险因素（

P

＜0.05），见表4。控制年龄、性别、IL-17、Th2、Treg等混杂因素后，以Th1、Th17、干扰素γ、趋化素等指标为自变量进行多因素logistic回归分析结果仍显示，Th1、Th17、干扰素γ、趋化素是影响AIH的危险因素（

P

＜0.05），见表5。

2.5 ROC评价血清中趋化素表达水平对AIH的诊断价值

ROC曲线分析显示，以对照组为参考，血清中趋化素水平对AIH诊断价值的曲线下面积（AUC）为0.897（95%

CI

：0.792～0.921），截 断值 为94.15 mmHg，其灵敏度、特异度分别为80.9%、88.4%；以ALD组为参考，则血清趋化素水平对AIH诊断价值的AUC为0.703（95%

CI

：0.614～0.793），截断值为116.95 mmHg，其灵敏度、特异度分别为57.4%、81.2%，见图1。

表4 自身免疫性肝炎（AIH）的多因素logistic回归分析

表5 控制混杂因素后自身免疫性肝炎（AIH）的多因素logistic回归分析

3 讨论

AIH是自身免疫反应介导的实质炎症性疾病，临床发病率逐渐升高，病人大多情况下起病过程较为隐匿，为慢性症状，少数病人是急性发作。趋化素的循环水平与多种因素密切相关，如体质指数、三酰甘油、血压等，其在肝脏和脂肪组织中高表达。当机体发生凝血、纤溶、炎症级联反应时，前体形式被蛋白酶水解成具有生物活性的趋化素。趋化素发挥作用是通过结合其受体G蛋白偶联受体、C-C类趋化因子受体样蛋白2。研究表明趋化素在胃肠道恶性肿瘤、肺癌等多种肿瘤组织及血清中高表达，并参与肿瘤的发生与发展，如促进肿瘤新生血管的形成；改变宿主免疫机制并刺激肿瘤进展。而本研究结果，显示AIH病人血清趋化素水平均明显高于对照组，提示趋化素可能是AIH的重要危险因素。

注：ALD为酒精性肝病。

T淋巴细胞在人体免疫应答中有着重要作用，其中CD4T淋巴细胞分化为Th1、Th2、Treg、Th17等细胞亚群，是通过在体内被不同抗原刺激、激活、增殖而发生的，Th1细胞表达以INF-γ和IL-2为主。Th2细胞主要功能是辅助B淋巴细胞，令其参与体液免疫。Treg细胞通过分泌抑制性细胞因子发挥免疫抑制作用维持免疫稳态。王君丽等研究证实，Th1/Th2平衡失调与结缔组织病相关性间质性肺疾病的发生有关。Th17细胞与上述细胞在功能上相互制约，其主要细胞因子是IL-17。顾娜等发现HBV感染相关肝纤维化病人Th17/Treg比值较正常组高。本研究结果显示，与对照组相比，ALD组、AIH组病人血清趋化素水平均明显升高；与ALD组比较，AIH组病人血清趋化素水平明显升高。提示血清趋化素水平异常表达，与ALD、AIH发生发展密切相关。CD4T淋巴细胞在AIH、ALD病人体内可能被不同抗原刺激、激活、增殖、分化后发挥免疫效应。进一步通过Pearson分析结果显示，血清趋化素与Th1、Th17、干扰素γ、IL-17均呈正相关，与Th2、Treg细胞比例呈负相关。提示可能是CD4T淋巴细胞比例影响炎症因子从而引发疾病，而趋化素与二者关系密切。多因素logistic回归分析显示，Th1、Th17、干扰素γ、趋化素是AIH的独立危险因素，提示可能由于趋化素结合受体趋化素-R进而趋化T淋巴细胞，使CD4T淋巴细胞及相关细胞因子的水平和（或）功能异常并诱导多种炎症因子引发炎症反应。另外通过ROC曲线分析，以对照组为参考，血清中趋化素水平对AIH诊断价值的AUC为0.857（95%

CI

：0.792～0.921），截断值为94.15 mmHg，其灵敏度、特异度分别为80.9%、88.4%；以ALD组为参考，则血清中趋化素水平对AIH诊断价值的AUC为0.703（95%

CI

：0.614～0.793），截 断 值 为116.95 mmHg，其灵敏度、特异度分别为57.4%、81.2%。提示以对照组为参考时，血清趋化素表达水平对AIH诊断价值较高，对于血清趋化素水平升高的病人，除考虑AIH之外，还应考虑ADL的可能。

综上所述，AIH血清趋化素水平高表达，可能为AIH促病因素，在AIH炎症反应、脂质代谢过程中发挥重要作用，为将来以趋化素为靶点治疗AIH提供一定理论依据。但本研究样本量少，且并没有对其机制及与预后情况的关系进行进一步研究，是本文的不足，后期需大样本对其作用机制作进一步研究和探讨。