张艳芳 ， 谢芝勋 ， 邓显文 ， 谢志勤 ， 张民秀 ， 罗思思 ， 谢丽基 ， 范 晴 ， 曾婷婷 ， 黄娇玲 ， 王 盛 , 刘加波

(广西壮族自治区兽医研究所 广西兽医生物技术重点实验室 ， 广西 南宁 530001)

鸡传染性贫血病毒(Chicken infectious anemia virus，CIAV)可引起3周龄以内的鸡严重贫血、出血，尤其是骨髓造血组织和胸腺等淋巴组织严重萎缩，进而导致雏鸡发生免疫抑制[1-3]。鸡细小病毒(Chicken parvovirus，ChPV)属鸡肠道病毒，主要侵害雏鸡，可引起以腹泻、精神抑郁、体温调节障碍、生长迟缓、营养吸收障碍等为特征的急性或慢性肠道性疾病，与矮小综合征和营养不良综合征有关[4-5]，这两种疾病在鸡群中普遍存在，均可引起雏鸡发育不良，严重危害养鸡业的发展，特别是有混合感染时，危害程度尤为明显，给养鸡业造成巨大损失[6]。因此建立有效的检测方法，加强规模化养鸡场对CIAV和ChPV的监测及防控极其重要。多重 PCR可同时检测和鉴别多种病原体，具有灵敏度高、快速、特异性好等优点，且操作简易、能实现标准化[7]，在鉴别诊断多种病原混合感染的临床病例中具有独特的优势[8]。本试验设计了 2 对CIAV和ChPV特异性引物，建立了能够同时检测这两种病毒的双重PCR方法。

1 材料与方法

1.1 主要病原体 CIAV、ChPV、禽肾炎病毒(ANV)、禽流感病毒H9亚型(AIV-H9)、鸡传染性喉气管炎病毒(AILTV)、鸡传染性支气管炎病毒(IBV)、新城疫病毒(NDV)、禽呼肠孤病毒(ARV)、马立克病毒(MDV)和大肠杆菌(E.coli)，由本实验室保存。

1.2 主要试剂 DNA/RNA提取试剂盒、细菌DNA抽提试剂盒、胶回收试剂盒、2×TaqPCR Mix，均购自北京全式金生物技术有限公司；反转录试剂、pMD 18T Vector、100 bp marker ladder，均购自宝生物工程(大连)有限公司。……