平佳宜，李鹏辉

(开封市中医院，河南 开封 475000)

糖尿病作为一种常见的慢性病，中国的糖尿病患病率从1980年的0.67%已上升到2013年的10.4%[1]。目前，我国糖尿病患者约为1.18亿人，居世界第一。在糖尿病患者中，T2DM患者占90%以上[2]。糖尿病的发生多伴随众多并发症的产生，长期高血糖状态可引起机体出现血脂异常，机体脂质过氧化物堆积，氧化应激，炎症和其他相关并发症的增加加重了糖尿病的病情[3-4]。近年来，中医药凭借多途径、多靶点、副作用小等优点，在糖尿病研究中取得了良好成果[5]。现代药理学研究表明，金莲花的主要成分为黄酮类，有机酸和生物碱，其中黄酮类为主要有效成分[6]。其性微寒，具有清热解毒、消肿之功效，临床研究表明，金莲花具有抗菌、抗病毒和抗氧化作用[7]。本研究探讨金莲花总黄酮对2型糖尿病患者血清炎性因子、脂质代谢和氧化应激的影响。

1 材料与试剂

1.1 动物

SPF级SD大鼠，雄性，年龄：6～8周龄，体质量220～240 g，济南朋悦实验动物繁育有限公司，许可证号：SCXK(鲁)20190003。高脂高糖饲料(含1.5%胆固醇、0.25%胆酸钠、10%猪油、5%蔗糖、83.25%普通饲料，北京博爱港生物科技有限公司)。

1.2 药物与试剂

金莲花总黄酮，南京泽郎生物科技有限公司，含量51.35%(即每100 g药材含TFBC生药量51.35 g)；盐酸二甲双胍(天津太平洋制药有限公司，批号：20171015)；链脲佐菌素(STZ，美国Sigma公司，批号：S0130)；糖化血清蛋白(GSP，批号：E2017 1222A)；胰岛素(INS，批号：E20171215A)；胰岛素自身抗体(IAA，批号：E20171212A)；总胆固醇(TC，批号：E201 71221A)；甘油三酯(TG，批号：E20171227A)；高密度脂蛋白(HDL-C，批号：E20171124A)；低密度脂蛋白(LDL-C，批号：E20171205A)；超氧化物气化酶(SOD，批号：E20171112A)；丙二醛(MDA，批号：E20171218A) ；总抗氧化能力(T-AOC，批号：E20171215A)；肿瘤坏死因子(TNF-α，批号：E20171228A)；白介素-1β(IL-1β，批号：E20171208A)；白介素-6(IL-6，批号：E20171228A)均购自苏州卡尔文生物科技有限公司。

1.3 仪器

血糖仪，罗氏公司，型号：活力型；高速冷冻离心机，型号：KS50R，湖南湘仪；全自动酶标仪，型号：HM-SY96A，山东食安生物科技有限公司。

1.4 方法

随机选取50只状态良好的大鼠，并选择10只大鼠作为空白组。其余大鼠用高脂饲料喂养4周，然后腹腔内注射STZ 70 mg/kg建立T2DM动物模型。1周后检测空腹血糖含量，选择40只小鼠，其血糖为16.7～21 mmol/L[8-9]。

1.5 分组与给药

成模动物随机分为模型组，盐酸二甲双胍组、金莲花总黄酮高剂量组、金莲花总黄酮低剂量组。各组动物给予相应药物灌胃，模型组和空白组给予同体积生理盐水，盐酸二甲双胍组(灌胃剂量350 mg/kg)，金莲花总黄酮高剂量组(200 mg/kg)，金莲花总黄酮低剂量组(100 mg/kg)，每天1次，连续给药6周。

1.6 指标检测

动态血糖值：在第2周、4周和6周，从眼神经丛静脉采集血液样本以检测空腹血糖。

血清指标检测：末次给药后2 h，每组动物腹腔内注射10%水合氯醛进行麻醉，并给腹主动脉插管以采集血液，检测血清中GSP、INS、IAA、TC、TG、HDL-C、LDL-C、SOD、 MDA、T-AOC、TNF-α、IL-1β、IL-6。

1.7 统计学方法

2 结果

2.1 对大鼠动态血糖的影响

与K组比较，M组动物空腹血糖值2～4周呈现升高趋势，差异具有统计学意义(P<0.01)；与M组比较，Y组及TFFTC-G组自第2周可不同程度降低模型大鼠空腹血糖值，差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)；TFFTC-D剂量组自4周开始，也可不同程度降低模型大鼠空腹血糖值，差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。见表1。

表1 对大鼠动态血糖的影响

2.2 对大鼠血清GSP、INS、IAA含量的影响

与K组比较，M组动物血清GSP、IAA含量增加，INS含量降低，差异具有统计学意义(P<0.01)。与M组比较，Y组及TFFTC-G、TFFTC-D组均可降低模型大鼠血清中GSP、IAA含量，提高血清INS水平，差异具有统计学意义(P<0.01)。见表2。

表2 对大鼠血清GSP、INS、IAA含量的影响

2.3 对大鼠血清SOD、MDA、T-AOC含量的影响

与K组比较，M组血清SOD和T-AOC含量降低，而MDA含量增加，具有统计学意义(P<0.01)。与M组比较，Y组和TFFTC-G、TFFTC-D组可以不同程度地增加模型大鼠血清中SOD和T-AOC的含量，降低模型大鼠血清中MDA的水平，具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。见表3。

表3 对大鼠血清SOD、MDA、T-AOC含量的影响

2.4 对大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6含量影响

与K组比较，M组血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平呈上升趋势，差异具有统计学意义(P<0.01)。与M组比较，Y组和TFFTC-G组可降低模型大鼠血清中TNF-α、IL-1β和IL-6水平，差异具有统计学意义(P<0.01)；TFFTC-D组也可降低模型大鼠血清中TNF-α水平，差异具有统计学意义(P<0.01)；此外，TFFTC-D组还可降低模型大鼠血清中的IL-1β和IL-6水平，差异具有统计学意义(P<0.05)。见表4。

表4 对大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6含量影响

2.5 对T2DM大鼠血清TC、TG、HDL-C、LDL-C影响

与K组比较，M组TC、TG和LDL-C水平升高，而HDL-C降低(P<0.01)。与M组比较，Y组和TFFTC-G组能增加模型大鼠血清中TC、TG和LDL-C的含量，差异具有显著统计学意义(P<0.01)。TFFTC-D组还可以增加模型大鼠血清中TC、TG和LDL-C的含量，差异具有显著统计学意义(P<0.01)；此外，还可以降低模型大鼠血清中HDL-C的含量，差异具有统计学意义(P<0.05)。见表5。

表5 对T2DM大鼠血清TC、TG、HDL-C、LDL-C含量影响

3 讨论

近年来，中药提取物或单体在T2DM研究方面备受关注，由中药提取物及单体成分从动物研究深入进行细胞水平或分子水平研究，科学性更强，也得到国际上认可[2]。T2DM病因复杂，研究表明胰岛素抵抗贯穿于T2DM发生发展的全过程，是T2DM的起因和主要发病机制。2型糖尿病患者发病过程将伴随血脂异常，呈现出血液中游离脂肪酸增加，甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白(LDL)增加而高密度脂蛋白(HDL)减少的病理现象[5]。此外，高血糖状态导致的血之功能紊乱也将是机体内部自由基增多，氧化应激反应增强，出现脂质过氧化物(MDA)堆积现象[10-11]。血脂紊乱及氧化应激反应均是T2DM常见并发症，而T2DM所引发的炎症反应；氧化应激、内质网应激、脂质异位沉积和糖脂毒性可导致胰岛素抵抗(IR)，引起或加重炎症反应，也是引起胰岛素抵抗的重要因素之一。炎症反应发生时，体内分泌多种炎症因子，通过内分泌、旁分泌途径，导致胰岛素信号转导的堵塞和体内胰岛素利用率降低，因此在体内诱导胰岛素抵抗，身体也会显示异常的炎症因子表达水平增加[3]。

本研究采用高脂高糖饲料与STZ腹腔注射相结合建立T2DM大鼠模型，正式实验前选取适当数量动物，针对STZ腹腔注射用量进行预实验，分别筛选60 mg/kg、70 mg/kg、80 mg/kg、100 mg/kg进行预实验研究，发现70 mg/kg给药剂量下动物成模率可达80%以上，死亡率低，因此，选取70 mg/kg进行腹腔注射。因此，进行必要的前期实验是保证动物建模率和降低后期死亡率的重要途径。本研究结果显示，模型组动物的空腹动态血糖值明显高于空白组，血清GSP、IAA，血脂(TC、TG、LDL-C)，炎性因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)，氧化应激指数MDA显著高于空白组，而INS、HDL-C、SOD、T-AOC的含量显著低于空白组，表明模型复制成功。与模型组比较，盐酸二甲双胍组以及金莲花总黄酮高剂量和低剂量组可降低动态血糖值，降低血清GSP、IAA、TC、TG、LDL-C、TNF-α、IL-1β、IL-6和MDA含量，并增加模型动物的血清INS、HDL-C、SOD和T-AOC含量，低剂量组虽可升高模型动物血清中HDL-C含量，但差异无统计学意义(P>0.05)。

综上所述，金莲花总黄酮可有效降低T2DM动物血清动态血糖值，增加胰岛素含量，降低血清炎症因子，改善血脂代谢紊乱，增强机体抗氧化能力，具有良好的降糖效果。但本次研究未深入解析出金莲花总黄酮的确切降糖机制及相关作用通路，后续需进一步深入研究与分析，探讨金莲花总黄酮的具体降糖机制，为临床防治糖尿病提供依据。