李占鸿，朱 沛，宋子昂，李卓然，杨振兴，李华春，杨 恒*，廖德芳*

(1.云南省畜牧兽医科学院，云南省热带亚热带动物病毒重点实验室，昆明 650224；2.云南农业大学动物医学院，昆明 650201)

蓝舌病病毒(bluetongue virus, BTV)感染引起的动物蓝舌病(bluetongue, BT)是一种侵害反刍动物的烈性虫媒传染病，绵羊感染后临床症状最为典型，表现为高热、消瘦、口唇充血肿胀及糜烂、鼻腔和胃肠黏膜出血溃疡、蹄冠脱落引起跛行等[1-2]。当新血清型BTV传入时，感染绵羊的发病率可达80%，死亡率高达40%，严重影响牛羊畜产品的正常国际贸易，给牛羊养殖业造成巨大的经济损失[3]。世界动物卫生组织(Office International des Epizooties, OIE)将BT列为法定报告的动物疫病，我国将其列为一类动物疫病[4]。目前，已在世界范围确认了27种BTV血清型(BTV-1～BTV-27)[5-6]，我国存在12种血清型BTV(BTV-1、-2、-3、-4、-5、 -7、-9、-12、-15、-16、-21与-24)的流行，主要分布于云南、广东、广西、江苏、湖南和新疆等地区[[7-10]。

BTV为呼肠孤病毒科(Reoviridae)环状病毒属(Orbivirus)成员，病毒基因组大小约20 kb，由10个节段(Seg-1～Seg-10)的双链RNA(double stranded RNA, dsRNA)组成，编码7种结构蛋白(VP1～VP7)和5种非结构蛋白(NS1、NS2、NS3、NS3a与NS4)[11-12]。Seg-5编码的NS1蛋白是高度保守的微管形成蛋白，可促进BTV编码蛋白的表达[13]。遗传进化分析表明，BTV的Seg-5/NS1序列在不同血清型毒株之间高度保守[14]，可作为BTV群特异性核酸检测的靶基因[15-16]。

环介导等温扩增(loop mediated isothermal amplification, LAMP)技术是Notomi等[17]在2000年发明的一种新型核酸扩增方法。该方法针对靶基因的6个保守区域设计4条特异性引物，利用BstDNA聚合酶的链置换活性，在64 ℃恒温条件下反应约1 h 即可完成扩增，加入环引物后还可大大缩短反应时间，仅需30 min左右即可完成扩增过程[18]。LAMP与其他病原检测技术相比，无需昂贵的仪器设备，反应过程在恒温水浴锅中即可完成，检测速度快，肉眼即可判定结果，非常适合病原的现场快速检测，目前已广泛应用于多种病原微生物的检测[19-21]。……