李斯熠，岳 华,2，汤 承,2*

(1.西南民族大学畜牧兽医学院，成都 610041； 2.动物医学四川省高校重点实验室，成都 610041)

纽布病毒(Nebovirus，NeV)是嵌杯病毒科(Caliciviridae)纽布病毒属(Nebovirus)的唯一成员。基因组长度为7 453～7 460 bp，分为两个开放阅读框(ORFs)，编码RNA依赖性RNA聚合酶(RdRp)、主要衣壳蛋白(VP1)和次要衣壳蛋白(VP2)等结构[1]。由于缺乏类似其他嵌杯病毒的双命名系统，因此，NeV的基因分型仍基于RdRp核苷酸或完整VP1氨基酸序列分别表述。目前，NeV可分为3种RdRp型(NB-like、NA1-like和SC-yak)和3种VP1型(基因1～3型)，其中，基因1型可进一步划分为4个 谱系(谱系1～4)[1]。

VP1是杯状病毒重要的结构蛋白，由S结构域和P结构域组成，P结构域进一步分为P1和P2子结构域，其中，P2结构域外表面含有组织血型抗原(histo-blood group antigens, HBGAs)的结合位点和抗原中和表位[1-2]。最近研究证实，NeV MA415-KOR毒株(基因1.3型)的VP1可与多种HBGAs结合，在病毒的感染与免疫过程中发挥重要作用[3]。RdRp与RNA的复制有关，它是一种易出错的酶，从而导致病毒快速进化[4]。

最近，本实验室证实NeV在我国的奶牛和青藏高原牦牛中广泛流行[5]。国内NeV流行毒株的RdRp基因型有 NB-like和SC-yak型；VP1基因型有1型(包括1.1、1.3和 1.4 3个谱系)、基因2型和3型，表明我国NeV VP1蛋白具有丰富的遗传多样性。本研究从2019年9—11月宁夏和河南的奶牛腹泻样本检测到VP1基因1.2型毒株，旨在通过分析其完整VP1和RdRp的分子特征，为进一步了解国内NeV的遗传多样性提供参考。

1 材料与方法

1.1 样本信息

2019年9—11月，从宁夏(8个场)和河南(5个场)分别采集了53份和58份犊奶牛腹泻粪便样本，共111份。所有样本于-80 ℃保存备用。

1.2 核酸的提取和反转录

用Trizol法提取样本总RNA，并使用PrimeScriptTM试剂盒(TaKaRa公司)反转录成cDNA，-20 ℃ 保存备用。……