黄 滨 王丽萍 林振孟

1.解放军联勤保障部队第九〇〇医院麻醉科，福建福州 350025；2.福建省肿瘤医院胃肠肿瘤外科，福建福州 350014

脊椎蛋白2（spondin2，SPON2）是分泌型细胞外基质蛋白，属于Mindin/F-pondin 家族的成员[1]。SPON2参与多种重要的细胞活动功能，比如促进神经元生长和发育[2-3]。先前研究发现在原发性肝癌、肾癌中SPON2 表达上升，并作为预后不良的重要指标[4-6]。本研究探讨SPON2 与胃癌间的关系。

1 材料与方法

1.1 细胞系、标本

胃癌细胞株BGC-823、MGC-803、SGC-7901 和正常胃黏膜细胞GES-1 购自上海中科院细胞库。选取2013 年1 月至2015 年9 月联勤保障部队第九〇〇医院（以下简称“我院”）病理科存档的120 例胃癌及相应癌旁组织蜡块。纳入标准：①腺癌；②根治性手术；③临床病理资料完整。排除标准：①术前新辅助化疗；②急诊手术。收集2019 年5 月至2020 年9月我院70 例胃癌患者、60 例慢性萎缩性胃炎（chronic atrophic gastritis，CAG）患者，60 例健康体检者血清，采用酶联免疫吸附试验检测SPON2 的表达水平，电化学发光法检测癌胚抗原（carcinoembryonic antigen，CEA）及糖类抗原19-9（carbohydrate antigen19-9，Ca19-9）。

1.2 主要试剂与仪器

兔抗人SPON2 抗体购自广州碧云天公司（批号：ab224645）。ELISA 仪器购自西门子（型号：ADVIA CENTAUR）。

1.3 研究方法

1.3.1 细胞培养DMEM 进行细胞培养，在5%CO2、37℃的培养箱进行传代。

1.3.2 Western blot 检测 培养细胞48 h，提取蛋白，电泳，转膜，加入一抗（稀释比例1:1000）过夜，加入二抗，显影。

1.3.3 免疫组化 石蜡组织标本切片，修复抗原，封闭蛋白，加入一抗（稀释比例1:1000）孵育过夜，加二抗，显色，复染，封片。SPON2 主要定位于细胞浆。根据细胞染色强度和阳性细胞比例进行分析。染色强度评分：不着色为0 分，淡黄色为1 分，棕黄色为2 分，棕褐色为3 分。阳性细胞百分比：阳性细胞百分比＜10%为0 分，10%～25%为1 分，＞25%～50%为2 分，＞50%～75%为3 分，＞75%为4 分。……