唐 莉，唐国英

（重庆市开州区人民医院，重庆 405400）

肺炎链球菌是社区获得性肺炎最常见的病原体。肺上皮细胞排列在呼吸道上，构成了对抗呼吸道病原体的天然防线，感染后，肺部会出现明显的炎症反应，肺泡上皮细胞的凋亡是细菌性肺部感染的主要病理特征[1]。miRNA作为细胞内的重要调控分子，在细胞凋亡信号转导过程中发挥关键作用[2]。戢慧等[3]采用基因芯片技术筛选和RT-PCR验证Ⅱ型肺泡上皮细胞（AECⅡ）凋亡相关miRNA 时发现，miR-449a-5p在模型中表达下调，miR-449a-5p可能在AECII 凋亡调控中起关键作用。但miR-449a-5p 对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡的影响机制目前还不清楚。本研究以AECⅡ细胞为研究对象，通过细胞转染和肺炎链球菌干预后，探讨miR-449a-5p在肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡中的作用，以期为肺炎的治疗提供新的思路。

1 材料与方法

1.1 实验材料 DMEM/F12 培养基、Annexin VFITC/PI 细胞凋亡检测试剂盒、Western blot 相关试剂购于北京索莱宝公司；胎牛血清购于Hyclone 公司；LipofectamineTM 2000 相关转染试剂购于Invitrogen 公司；白细胞介素-6（IL-6）和白细胞介素-10（IL-10）酶联免疫吸附测定（ELISA）检测试剂盒购于上海纪宁公司；BCA蛋白定量试剂盒购于上海碧云公司；双荧光素酶报告基因检测试剂盒购于Promega 公 司；miR-NC、miR-449a-5p mimics、pcDNA3.1、pcDNA3.1-Bax、WT-Bax和MUT-Bax的构建和测序由上海生工公司提；Bcl-2 抗体、Bax 抗体、GAPDH 抗体和HRP 标记的Ⅱ抗均购于Abcam 公司。

1.2 细胞培养、实验分组和处理 AECⅡ由本实验室分离于健康雄性SD 大鼠，并经纯化和鉴定。用DMEM/F12 培养基在37 ℃、含5%CO2的细胞培养箱中进行原代培养，24 h 后更换培养液，继续培养12 h后备用。将AECⅡ细胞分为6组：对照组、肺炎……