袁明翠，张启书，李维冉，叶超，谢航航，黄惟巍，马雁冰

1.昆明医科大学，云南 昆明 650500；2.中国医学科学院 北京协和医学院医学生物学研究所，云南 昆明 650118

OX40（也被称作CD134／TNFRSF4）是第二代免疫检查点的代表性靶点之一。相比于CTLA-4及PD-1等共抑制分子，OX40属于T细胞表面的共刺激分子，广泛表达于炎症及肿瘤部位［1］。OX40是一种Ⅰ型跨膜糖蛋白，包括膜外区、跨膜区和膜内区3部分，其胞外段含有4个NGFR样结构，为半胱氨酸富集区，通过二硫键形成便于与配体结合的三维结构域［2］。小鼠和人OX40主要在活化的T细胞上表达，也包括自然杀伤细胞、自然杀伤T细胞及中性粒细胞，其配体OX40L（也被称作CD252）则表达于活化的抗原呈递细胞及血管内皮细胞等［3］。通过传递协同刺激信号，OX40使得活化的效应T细胞增殖及存活，同时有助于记忆T细胞的生成［4-6］。另外，OX40在肿瘤中可降低Treg细胞的活性，进而维持效应T细胞的功能［7-8］。在一些小鼠模型中，激动型OX40特异性单克隆抗体可消耗Treg细胞［9-10］。联合使用OX40特异性激动型抗体和抑制信号通路的阻断剂，可活化CD8+T细胞并分泌高水平IFNγ和颗粒酶B，进而抑制Treg细胞［11-14］。OX40激动型抗体对Treg细胞和效应T细胞的不同调节作用，有助于机体免疫系统发挥抗肿瘤效应［4，15-16］。

本研究旨在构建呈现小鼠OX40抗原表位的病毒样颗粒（virus-like particles，VLPs），为进一步以主动免疫方式靶向OX40调控T细胞免疫功能，进行疾病干预的研究奠定基础。

1 材料与方法

1.1 质粒及菌株 大肠埃希菌（E.coli）DH5α及表达修饰的乙型肝炎核心抗原（hepatitis B core antigen，HBcAg）的质粒pHBcAg为中国医学科学院医学生物学研究所分子免疫室保存，pHBcAg在对应HBcAg第78与79位氨基酸的核苷酸序列之间引入了BamHⅠ与EcoRⅠ位点，允许编码抗原的寡核苷酸片段插入。……