曹扬，王莹

吉林大学第一医院，吉林 长春 130021

乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）感染致全球超过2.5亿人罹患多种肝病，每年约140万人死于HBV相关疾病，包括肝硬化、肝衰竭和肝细胞癌［1-2］。目前，已批准的HBV感染治疗药物仅为核苷酸类似物和干扰素（interferon，IFN）［3］，细胞内抗病毒因子用于治疗HBV感染尚处于研发阶段，是HBV领域重要的基础研究之一。Na+／K+ATPaseβ1亚基（ATP1B1）作为细胞Na+／K+ATPase调节亚基的主要组分，不仅调控其自身活性，还参与T细胞活化［4］。有研究表明，Na+／K+ATPaseβ亚基与某些病毒感染有关，如ATP1B1可作为人类巨细胞病毒（human cytomegalovirus，HCMV）UL136蛋白及甲、乙型流感病毒M2蛋白的伴侣调控病毒复制［5-7］；β3亚基可降低HeLa细胞中骨髓基质细胞抗原-2（bone marrow stromal cell antigen-2，BST-2）介导的人类免疫缺陷病毒-1（human immunodeficiency virus-1，HIV-1）产生的限制［8］，还可与肠道病毒71（enterovirus 71，EV71）的3A蛋白相互作用，通过增强Ⅰ型IFN的产生来抑制EV71复制［9］。

维甲酸诱导基因蛋白-Ⅰ（retinoic acid-inducible gene-Ⅰ，RIG-Ⅰ）和黑色素瘤分化相关抗原5（melanoma differentiation-associated 5，MDA5）是细胞内识别病毒异常mRNA的模式识别受体（pattern recognition receptor，PRR），参与免疫应答调节，在天然免疫反应中具有重要作用［10-11］。研究表明，RIG-Ⅰ主要识别5′端带三磷酸基团的RNA（包括单链和双链RNA）和短的双链RNA；MDA5主要识别普通的双链RNA或poly（I:C）。未感染病毒的条件下，RIG-Ⅰ和MDA5的上调也可促进细胞分泌Ⅰ型IFN，可启动下游IFN诱导基因（interferon stimulated gene，ISG）的表达，其中包括较多天然抗病毒因子，如ISG15、ISG56、GBPs、OASs和BST-2等，对不同病毒具有拮抗作用［12-15］。本研究通过建立过表达和沉默ATP1B1的HepG2细胞模型，探讨ATP1B1对细胞中HBV复制的影响，为寻找抗HBV的新治疗靶点和方法提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 菌株、细胞、质粒及基因 HepG2（No.77400，ATCC）、HepG2.2.15、HepAD38细胞、质粒VR1012-ATP1B1（由cDNA文库获取带有HA标签的ATP1B1基因，插入至载体VR1012）及载体VR1012由吉林大学第一医院检验科保存并提供；……