叶传进

（南京大学医学院附属口腔医院（南京市口腔医院） 口腔病理科，江苏 南京）

0 引言

研究牙周组织的生理、病理及病生理机制最常用的方法是免疫组化，牙周组织中硬组织钙含量较多，硬脆、易碎、难切；软组织则易受拉扯、挤压产生变形分离甚至脱落。因此牙-牙周组织切片的制作难度较大，且对免疫组化尤其是抗原修复和缓冲液长时间浸泡染色的过程中容易发生脱片现象。牙-牙周免疫组化染色切片的效果对实验结果影响较大，本研究即分析高压修复、酶修复、隔水热修复3种抗原修复方法对牙-牙周免疫组化切片染色的效果，具体报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

压力锅；复合消化酶和兔抗鼠巨噬细胞单克隆抗体，免疫组化MaxVision检测试剂盒，DAB显色试剂盒；柠檬酸盐缓冲液（0.01 mol/L、pH值6.0）；PBS缓冲液（2000 mL/包、pH 值 7.2~7.4）。

取用颈椎脱位法致其死亡的成年健康雄性大鼠，取出大鼠上下颌骨磨牙区组织块，用10%中性甲醛液固定24 h，10% EDTA 脱钙3~4周，常规脱水，石蜡包埋。

1.2 方法

1.2.1 组织切片处理

将组织蜡块于-20 ℃下冷冻2 min后取出，使用轮转切片机连续切2 μm一片的切片，将切片展开后再使用粘附载玻片捞片，为保证切片效果应确保每张切片在载玻片中心位置。将上述组织切片每组各捞20片一共3组，将水温调整至46 ℃后把切片摊开，使组织与载玻片平整粘附，然后于70 ℃烤片机上将切片与载玻片牢固结合，效果达到不出现重力移位现象即可将载玻片放入烘片机，温度调整为60 ℃，烘烤2 h。

1.2.2 切片脱蜡水化处理