韩 伟， 魏丰贤， 张有成

兰州大学第二医院 普通外科， 兰州 730030

原发性肝癌是全球尤其我国癌症死亡的主要原因之一，总生存率仅为12.1%[1-2]。手术治疗目前仍是肝癌治疗的首选方案，但临床中往往面临早期确诊率低，大部分就诊患者存在肝内乃至远处转移情况，导致长期生存率较低[3]。总体而言，肝癌侵袭性强相关的早期转移和复发是导致患者生存率差的最主要原因，因此侵袭、转移相关通路一直是肝癌临床转化研究的重点领域。

甲胎蛋白(AFP)目前仍是临床工作中肝癌诊断、预后和随访监测的重要标记[4-5]。AFP在肝癌中表现出多种生物活性，前期研究发现用合成AFP小干扰RNA(small interference RNA, siRNA)转染肝癌细胞，靶向沉默AFP基因的表达可以抑制肝癌Huh7细胞的增殖，并可诱导肿瘤细胞的早期凋亡[6]，但是目前关于AFP与肝癌侵袭、转移的关系及机制尚不完全清楚，因此本实验通过沉默AFP基因在肝癌HepG2细胞中的表达，观察其对HepG2细胞侵袭、转移等生物学行为的作用，以及探讨其相关机制，为肝癌相关侵袭和转移的临床应用转化提供一定支持。

1 材料与方法

1.1 材料 HepG2细胞(中科院上海细胞生物研究所)，PMI1640培养基(HyClone公司)，胎牛血清(HyClone公司)，AFP siRNA转染试剂盒(Invitrogen公司)，Trizol，cDNA反转录试剂盒、qRT-PCR试剂盒(大连TaKaRa公司)，红色荧光标记的寡核苷酸(Invitrogen公司)，AFP ELISA检测试剂盒(上海西塘公司)，Transwell小室(Millipore公司)，Matrigel(BD Biosciences公司)，AFP一抗(北京博奥森公司)，vimentin (Sigma-Aldrich公司)，AKT，p-AKT，N-cadherin，E-cadherin(美国CST公司)，GAPDH一抗(上海碧云天公司)。

1.2 方法

1.2.1 实验分组 HepG2细胞接种于6孔板，无血清RPMI1640培养基恒温箱继续培养24 h，分为空白对照组(不做任何处理)、阴性对照组(转染阴性siRNA)和AFP siRNA组(转染AFP siRNA)。……