路 蔓，付 强，张 静△

空军军医大学第二附属医院：1.检验科；2.泌尿外科，陕西西安 710038

目前，越来越多的研究证实，恶性肿瘤的发生与炎症密切相关[1]。膀胱癌患者普遍存在炎性反应，肿瘤坏死因子-α(TNF-α)是一种常见的炎性反应指标，有研究表明TNF-α水平与恶性肿瘤的进展相关[2]。有研究发现，在肝细胞肝癌、前列腺癌、膀胱癌等恶性肿瘤中，核因子-κB(NF-κB)信号通路存在异常激活的现象，并且该因子直接影响着炎症与癌症的关系[3]。本研究拟了解TNF-α诱导对膀胱癌细胞NF-κB通路分子表达及细胞增殖水平的影响，现报道如下。

1 材料与方法

1.1材料 人膀胱癌细胞2株，即T24和5637，均统一由中科院广州研究所提供。

1.2仪器与试剂 酶标仪(Bio-Rad 680，美国伯乐公司)；实时荧光PCR仪(ABI 7500，德国Eppendorf公司)；RPMI 1640培养基(批号：8114641，上海信帆生物科研所)；胎牛血清(批号：56H4627，上海江林生物科技有限公司)；重组人TNF-α试剂(批号：CYT-233-a，默克生命科学)；CCK-8试剂盒(批号：WZ736，上海酶联生物科技有限公司)。

1.3方法

1.3.1培养并处理膀胱癌细胞 选取人膀胱癌细胞株T24和5637，采用含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基进行培养，在37.5 ℃、5%二氧化碳(CO2)条件下培养至对数生长期。观察培养的情况，待以一定浓度铺板生长后，对T24和5637进行处理。需要注意的是，在处理之前必须要同步化处理，具体操作要求为使用无胎牛血清培养液进行饥饿处理。根据不同的处理方法，分为两组，TNF-α处理组采用50 ng/mL TNF-α处理，对照组采用同等体积的磷酸盐缓冲液(PBS)处理。

1.3.2实时荧光定量PCR检测 将对数生长期的细胞株，以(2～3)×107/mL的水平接种于24孔板中，同步化处理之后，将细胞分成3个不同的组，每组设置3个复孔，且独立重复3次。……