聂 英，孙 明，何彦春，韩庆彦，尚立宏

(1. 民勤县畜牧兽医工作站，甘肃 武威 733399；2. 张掖市动物疫病预防控制中心；3. 甘肃省动物疫病预防控制中心)

鸡滑液囊支原体病，又称鸡传染性滑膜炎，是由鸡滑液囊支原体(Mycoplasma Synoviae，MS)引起幼龄鸡和火鸡的一种传染病，广泛分布于世界各地，临床特征多表现为病鸡关节肿大、滑液囊及肌腱发炎以及实质器官的肿大。由于发病病程缓慢且难以根除，鸡群多呈现不同疾病的混合感染，加剧病情的蔓延传播，常常导致鸡群饲料利用率降低，生产发育迟缓，产蛋量下降，淘汰率增高，已成为制约养禽业健康发展的重要因素之一，给世界范围内的家禽养殖业造成了巨大的经济损失。

鸡滑液囊支原体病在澳大利亚、南美洲、亚洲、欧洲和非洲已有多例报道，但大多数病例呈区域性分布，很少有大规模疫情发生。在过去的十年中，鸡滑液囊支原体病似乎已经取代鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum)在家禽中的地位，越来越受到人们的重视，尤其是其亚临床感染和诱发鸡蛋壳顶端异常(Eggshell apex abnormalities，EAA)和鸡减蛋综合征等多种疾病流行。

迄今为止，河西地区以促进农民增收为目标，不断调整优化畜牧养殖结构，做大做强肉鸡产业，但在鸡病的防控工作中尚无鸡滑膜囊支原体感染的相关数据，发病率和流行病学情况不明。本调查通过酶联免疫法(ELISA)和聚合酶链式反应(PCR)对河西地区鸡群进行流行病学调查，旨在提高河西地区鸡养殖场(户)对鸡滑液囊支原体病危害和防控的认识，为禽病的综合防治奠定基础和提供参考。

1 材料与方法

1.1 试剂

鸡支原体PCR检测试剂盒购自哈尔滨国生生物科技股份有限公司，鸡支原体酶联免疫法检测试剂盒AsurDxTM Mycoplasma synoviae Antibody Test Kit Manual购自Biostone Animal Health LLC(美国)，琼脂糖、TAE缓冲液为Solarbio公司产品。

1.2 样品

临床检测样品于2019年8月～2020年4月采自于河西地区部分县(区)养殖场和散养户饲养的蛋鸡和肉鸡血清样品以及民勤县城区屠宰门店鸡跗关节组织样品，所有样品均采集于健康未免疫鸡支原体疫苗的鸡群，鸡群存栏量介于50～20 000羽的散养户和养殖场，采样原则以小群(1 000羽份以下)采样比例3%～10%，大群(1 000羽份以上)采样比例0.1%～0.3%。样品信息详见表1，病原学样品采用鸡支原体PCR检测试剂盒提取基因组DNA，置于-20℃保存备用。

1.3 方法

酶联免疫法(ELISA)和PCR方法检测步骤按照说明书的操作执行，阴性、阳性对照同时成立时，试验结果才有效。酶联免疫法实验成立条件为阴性对照PP值<50%，阳性对照OD值≥0.5，样品百分率正性(PP值)计算公式=100×样品OD值/阳性对照OD平均值，评判标准为样品PP值≥50%为阳性，反之样品PP值<50%为阴性。PCR检测方法在25 μL反应体系中进行：PCR 反应液14.5 μL，基因组模板2.5μL，PCR用水8 μL。反应程序为：95 ℃预变性2 min；95 ℃变性30 s，52 ℃退火30 s，72 ℃延伸45 s，35个循环；72 ℃再延伸8 min，4 ℃保存。扩增结束后，对PCR产物用1.5%的琼脂糖凝胶(含8 μL/100 mL的Goldview I 型核酸染色剂)电泳分析，观察扩增结果。在700 bp位置出现特异性目的条带时，判定为鸡支原体病原样品阳性。

2 结果

2.1 血清学样本检测结果

969份鸡血清样本ELISA检测结果见表1，武威市民勤县鸡群的阳性率为33.70%，张掖市鸡群的阳性率为18.71%～32.90%之间，平均感染率为28.38%。

表1 临床样品检测结果统计表

2.2 病原学样本检测结果

18份鸡跗关节组织样品PCR检测结果见表1和图1，武威市民勤县城区屠宰门店出售的肉鸡样品中阳性检出率为38.89%。

图1 鸡滑液囊性支原体的 PCR 扩增检测结果

3 讨论

自20世纪50年代鸡滑液囊支原体病首次在美国报道以来，越来越多的研究人员开始认识到该病在家禽中的重要性。近年来，国内外鸡支原体发病率呈上升趋势，严重影响了养禽业的发展，已成为制约养禽业健康发展的重要因素之一。引起鸡支原体的病因主要为败血性支原体和滑液囊支原体，滑液囊支原体以侵害禽类的滑液囊为主，表现症状常因感染的菌株不同而略显差异，青年鸡长势缓慢，开产期延长，产蛋鸡异性蛋如沙皮蛋、畸形蛋和破蛋的比率增加，肉鸡滑膜受侵害后多导致行走不便。2017年，国内首次证实养殖场各年龄段中国地方鸡品种均存在大规模的鸡滑液囊支原体感染流行。3周龄雏鸡可同时携带母源抗体和病原，肉鸡抗体产生的时间和临床发病率情况受疫苗抗体水平的影响很大。鸡滑液囊支原体感染的疾病潜伏期通常为11～21 d，但垂直传播的时间仅为6 d，如何能有效防控滑液囊支原体引起的腿病和呼吸道问题，已成为业内人士的关注焦点。

2019年山东省平度市某养殖场鸡发生滑液囊支原体病导致病鸡淘汰率达10%，产蛋量下降5%～10%。本文通过酶联免疫法(ELISA)和聚合酶链式反应(PCR)检测方法对河西地区鸡群进行鸡滑液囊支原体病的流行病学调查，武威市民勤县鸡群的阳性率为33.70%，张掖市鸡群的阳性率为18.71%～32.90%之间，河西地区鸡群的血清学平均感染率为28.38%，病原学平均感染率为38.89%。通过问卷调查，出现屠宰门店病原学阳性率过高的原因多是门店倾向于收购散养户饲养的肉鸡，加之散养户在鸡群育雏过程中常常忽视对鸡群的管护和对鸡支原体病的药物预防。通过以上流行病学调查，鸡滑液囊支原体在河西地区鸡群中广泛存在并流行，这就要求防疫工作者和养殖户必须采取有效的防控措施来控制传播。

加强对鸡滑液囊支原体病的防控，养殖户不仅要做好鸡场生物安全措施，还得制定科学合理的消毒方案，通过种源净化和优化饲养管理。由于本病可以经蛋垂直传播，也可水平传播，既可以单独发生，又可以并发或继发于其他鸡病，加重病情，引入后不易清除，加上母源传播及病原在环境大量存在的情况，鸡群多存在免疫抑制，疫苗的保护效果不佳，业内人士多推荐采用药物预防和治疗相结合的防控措施，必须做好养殖场饲养管理工作，降低饲养密度，采用“全进全出”模式，建立无支原体病鸡群，及时淘汰阳性鸡群，病鸡可使用对支原体敏感的抗生素或大环内酯类抗生素进行对症治疗。建议养殖场应做好综合防控措施，适时提高发育期鸡的母源抗体水平，有效控制发育窗口期鸡滑液囊支原体的活性，可能是预防鸡滑液囊支原体感染的有效策略之一。

4 结论

文章采用酶联免疫法(ELISA)和聚合酶链式反应(PCR)检测方法对河西地区的鸡养殖场和屠宰门店进行鸡支原体病原的流行病学调查和实验，涉及到的市县均有病原检出，血清学平均感染率为28.38%，病原学平均感染率为38.89%。实验结果证明鸡滑液囊支原体在河西地区鸡群中广泛存在并流行，这就要求防疫工作者和养殖户必须采取有效的防控措施来控制传播。