王会生,高红丽,张 辉 ,薛 平,韩庆彦,*

(1.礼县畜牧兽医站，甘肃 礼县742200；2.甘肃省动物疫病预防控制中心)

规模养鸡生产中，曾一度大量使用乃至滥用抗菌药物，为了解细菌对抗菌药物的耐受情况，笔者进行了规模养鸡场鸡舍环境及肠道细菌对15种抗菌药物的抑菌实验，从而为鸡病防治中减少抗菌药物的使用提供依据。

1 实验方法

通过在环境和机体采取样品，在普通肉汤和麦康凯琼脂培养基上培养分离出大肠杆菌，再在普通琼脂培养基上，对15种抗菌药物进行药敏试验；在普通肉汤和琼脂培养基中培养分离出金黄色葡萄球菌，在普通琼脂培养基上分别进行15种抗菌药物对于大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的药敏试验。从而掌握规模养鸡场环境及其鸡群寄生的细菌对抗菌药物的敏感性。

1.1 样品采集

采样鸡场的选择和抗生素使用情况 共随机选择了两个乡镇的5个存栏1万只以上的规模养鸡场，有关情况见表1。

表1 规模养鸡场有关情况

环境采样 采样前用灭菌生理盐水将灭菌棉签浸湿，在采样场鸡舍内水槽、料槽以及墙壁处随机采样，在采样点充分擦拭，每个点各采样3份共采集9份环境样品，5个养鸡场共采样45份。采集样品装入灭菌小试管，1h内送实验室检测。

鸡口腔泄殖腔采样 在上述采样时，每个鸡场随机选取3只鸡，分别采取口腔和泄殖腔棉拭子，每场采集6份样品，装入小试管送检。5个养鸡场共计采样30份样品。

1.2 细菌培养

将以上75份样品，分别接种肉汤培养基进行细菌增值培养，37℃培养24 h，然后分别划线接种麦康凯琼脂和普通营养琼脂培养基，再进行37℃24h培养，普通琼脂上如果菌落生长不好，可以延长培养6～12 h。

1.3 细菌初步鉴定

大肠杆菌初步鉴定 在麦康凯培养基上挑选粉红色光滑边缘整齐的单个菌落，镜检为革兰氏阴性杆菌，并挑选相同菌落接种葡萄糖发酵管进行糖发酵实验，37℃培养48 h，产生轻微气体、变黄；刺种三糖铁培养，37℃24 h培养，看到底部变黄有黑色沉淀；接种蛋白胨水， 37℃培养48 h，再加入吲哚试剂，出现红色者。经过以上三个生化试验可鉴定为大肠杆菌，进行药敏试验。

金黄色葡萄球菌初步鉴定 环境样品在普通琼脂上挑选露滴状边缘整齐金黄色菌落，采用革兰氏染色镜检，呈革兰氏阳性葡萄串样者，初步鉴定金黄色葡萄球菌，进行药敏试验。

1.4 药敏试验

1.4.1 材料 15种药敏试纸执行标准WS/T125-1999，药物含量30μg/片。其中土霉素药敏试纸由上海绿盟有限公司出品，其余14种药敏试纸由杭州生物制剂有限公司出品，批号见表2。常规法制作9cm普通营养琼脂培养基等培养基若干。数显游标卡尺一把。

表2 15种抗菌药物药敏试纸生产批号

抗菌药物判定标准，抑菌环直径≥4.5mm为高度敏感，2～4.5 mm为中度敏感，1～2 mm为轻度敏感，≤1 mm为耐药。

1.4.2 药敏试验 将初步鉴定的大肠杆菌和金黄色葡萄球菌接种到9 cm普通营养琼脂培养基中，同时将药敏试纸用无菌眼科手术镊小心夹放在培养基上，37℃培养24 h后，用游标卡尺测量试纸周围抑菌环直径并登记。

2 结果

2.1 45份环境样品、30份消化道样品大肠杆菌药敏试验抑菌环的平均值见表3

表3 15种抗菌药物对于大肠杆菌抑菌环的平均值 mm

2.2 金黄色葡萄球菌药敏试验的抑菌环平均值

在口腔和泄殖腔样品中培养出的金黄色葡萄球菌菌株少，75份样品中金黄色葡萄球菌检出菌株数如表4。

表4 五个规模场环境检出金黄色葡萄球菌菌株数

15种抗菌药物对于金黄色葡萄球菌的抑菌环平均值见表5。

表5 15种抗菌药物对于金黄色葡萄球菌抑菌环平均值 mm

2.3 各规模养殖场之间大肠杆菌药敏试验结果见表6和表7

表6 15种抗菌药物对五个规模场饲槽环境大肠杆菌抑菌环平均值 mm

场1由于养殖时间较短，其环境内样品培养的大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的敏感性较其余四个养殖场较强，而场2养殖时间虽比其余三个场多两年，但区别并不明显。以饲槽采样的大肠杆菌为例，场1的15种抗生素抑菌环直径平均值为 3.66 mm，比其余四个规模场的平均数3.03 mm、3.09 mm、3.23 mm、2.90 mm显著高，而五个场的抑菌环平均值为3.18 mm，显示规模场饲养的时间越长，其场内环境细菌的耐药性就越强。

而在五个饲养场内鸡肠道采样的细菌来说(见表7)，其五个规模场的15种常见抗菌药物的抑菌环分别为2.64 mm、2.47 mm、2.30 mm、2.57 mm、2.57 mm，五个场的平均值为2.51 mm，平均值差异不大，显示规模场饲养时间长短、鸡群的饲养方式等对于鸡的肠道细菌耐药性的影响不显著。

表7 15种抗菌药物对泄殖腔肠道大肠杆菌抑菌环平均值 mm

3 讨论

3.1 药物敏感性

对于大肠杆菌，庆大霉素、妥布霉素、头孢拉定、头孢曲松、卡拉霉素、林可霉素的抑菌效果比较敏感，红霉素、氟苯尼考、恩诺沙星、氨苄西林的抗菌效果次之，而土霉素、青霉素、头孢唑啉、头孢氨苄、磺胺异噁唑等的抗菌效果很差，其耐药性很强。尤其是土霉素和磺胺异噁唑的抗菌效果接近于零。

对于葡萄球菌，氟苯尼考、头孢拉定、头孢唑啉、头孢曲松、卡拉霉素的抑菌效果较好，敏感性强，而青霉素、氨苄西林、红霉素、林可霉素的抗菌效果次之，土霉素、庆大霉素、妥布霉素、恩诺沙星、磺胺异噁唑等的抗菌效果很差，尤其是土霉素和磺胺异噁唑的抗菌效果接近于零。

3.2 结合养殖及用药调查情况分析

各规模场环境样品和鸡肠道样品分离细菌对不同抗菌素的敏感性分析，规模养鸡场对于土霉素、青霉素、磺胺类的使用是普遍和长期的，且环境中有一定残留。在表3的数据里，可以看出五个规模场的药敏试验结果明显地显示，在鸡群口腔和泄殖腔分离的大肠杆菌抑菌环更小，一般来说接近或小于平均值；而在环境里分离出的大肠杆菌的培养基上的抑菌环就相对大一点，一般来说大于或等于平均值。这个情况在表6和表7即五个规模场的饲槽和同时在鸡泄殖腔采样的大肠杆菌的抑菌环大小上也是同样的，其饲槽平均的抑菌环为3.18 mm，而泄殖腔平均的抑菌环为2.57 mm，说明鸡体内肠道细菌耐药性更强。

前几年，这些鸡场多采取7日龄前后在饮水中添加10%阿莫西林可溶性粉，15～19日龄饲料中添加10%多西环素，成年后在饲料中添加替米考星、土霉素或泰乐菌素等用药程序；目前由于国家市场监管部门对肉、蛋进行药物残留检测，一旦发现有残留则将该鸡场列入黑名单，尤其对给农村中小学生供应鸡蛋的养殖场监测更为严格。不排除会有个别不法养鸡场户在早期使用抗生素，调查中场主虽然没有承认，但以上药敏试验结果也从侧面反映了这个问题。

3.3 中西医结合防治

规模养鸡疫病防治中，虽然已经开始减少抗生素应用，但环境中依旧存在有一定的耐药性细菌，要稳定降低细菌耐药性，实现绿色养殖任重而道远。目前要积极引导帮助规模养鸡场改变用药，尽量使用抑菌效果较好的抗菌药物，精准用药减少对一些抑菌效果较差药物的使用非常重要。同事要采用中草药如双黄连、麻杏石甘汤、白头翁等方药和其他中药的各种剂型，微生态制剂、酸制剂、植物精油等的使用，结合生物安全等减抗鸡病防治技术，是必由之路。