表达大熊猫源犬瘟热病毒H蛋白复制缺陷型重组腺病毒的构建及鉴定
2021-08-03陈廷炜孟宪踊王铁成高玉伟夏咸柱
陈廷炜 孟宪踊 王铁成 高玉伟 冯 娜* 夏咸柱*
(1.吉林农业大学动物科学技术学院,长春,130118;2.军事医学研究院,军事兽医研究所,吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室,长春,130122)
犬瘟热(canine distemper,CD)是由犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)感染引起的一种急性、热性、高度接触性和高致死性的病毒性传染病。近年来,CDV感染的宿主范围逐渐扩大,包括犬科(Canidae)、猫科(Felidae)、鬛狗科(Hyaenidae)、鼬科(Mustelidae)、浣熊科(Procyonidae)、灵猫科(Viverridae)、熊猫科(Ailuridae)及非人灵长类(Non-human primates,NHPs)等动物。1997—2015年累计7只圈养大熊猫(Ailuropodamelanoleuca)感染CDV死亡,提示CD已成为威胁大熊猫生命安全的第一大传染病[1]。经过科研人员的不懈努力,全球大熊猫圈养种群数量已超过600只,可持续圈养种群基本形成。为了降低大熊猫感染CD的风险,对CD疫苗免疫的需求显得尤为迫切。
CDV属于副黏病毒科(Paramyxoviridae),麻疹病毒属(Morbillivirus),是负链单股不分节段的RNA病毒。CDV基因组的长度为15 690 bp,基因组从3′端到5′端共编码6种蛋白:核衣壳蛋白(N)、磷蛋白(P)、膜蛋白(M)、融合蛋白(F)、血凝蛋白(H)、大蛋白(L)[2-3]。其中CDV H蛋白基因长度为1 944—1 946 bp,只有1个开放阅读框,相对分子质量为76 000—85 000。H蛋白位于病毒粒子表面,属于Ⅱ型糖蛋白,其上分布有许多抗原表位,是诱导机体产生中和抗体的主要结构蛋白,发挥着体液免疫反应主要诱导剂的功能[4]。此外,H蛋白还包含细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位,可产生特异的CTL活性,通常用作基因工程疫苗的靶标基因,以预防CD[5]。
腺病毒载体是最为常用的疫苗开发和基因治疗的病毒载体[6],近几年发展很快,已经在全球数百个临床试验中进行了测试,证明该病毒载体具有良好的安全性,宿主的范围广泛,产生重组病毒滴度较高[7],外源蛋白表达量高,并且还具有高免疫原性[8-10]。……
