杨国祥 周豪 朱功良 李勇 蔡华锐 张俊 陈婧 陈光 冯伟 陈全姣

摘 要： 为满足高通量快速检测野鸟中禽流感病毒的需要，本研究针对A型流感病毒M基因保守区域设计了一对引物和探针，建立了一种能够检测A型禽流感病毒的实时荧光定量PCR方法，并对该方法的灵敏性、特异性和稳定性进行了评估。结果显示，该方法相较于传統的鸡胚分离和RT-PCR方法，具有灵敏度高、特异性好和耗时短等优点，可用于检测野鸟中携带的禽流感病毒。

关键词： 禽流感病毒;野鸟;荧光定量RT-PCR

中图分类号：S851.3文献标识码：A文章编号：1004-3020（2021）03-0035-05

野生鸟类作为禽流感病毒（Avian influenza virus，AIV）的天然宿主，在流感病毒的贮存、传播和变异中发挥着重要作用。所有亚型AIV均能从野鸟体内分离，它们携带病毒，但一般不表现出临床症状，并且可以通过迁徙将流感病毒扩散至世界各地。从家禽和哺乳动物体内分离到的流感病毒均直接或间接来自野鸟，对家禽养殖业和公共卫生安全造成了严重威胁，因此建立科学快速的诊断方法显得尤其重要。传统的流感病毒分离鉴定方法面临着耗时长等缺点，因此建立一种更加快速、准确、灵敏的方法来检测野鸟中携带的流感病毒，对于流感病毒的监测与预警显得尤为重要。实时荧光定量PCR （Quantitative Real-time PCR，QPCR）技术以其快速、特异性强、灵敏度高，重复性好，全封闭反应等优点，被广泛应用于各种病原检测中。本研究基于A型AIV中高度保守的M基因作为检测靶点，建立了一种TaqMan探针实时荧光定量PCR方法，用于检测野鸟粪便样本中的流感病毒，既可以作为应急检测技术应对突发疫情，也可以用于对野鸟携带的流感病毒进行常规检测。……