李飞飞，王贝贝，赖颖芳，杨菲颖，尤民生，何玮毅

单等位基因的敲除显著降低小菜蛾的生殖力和育性

李飞飞，王贝贝，赖颖芳，杨菲颖，尤民生，何玮毅

闽台作物有害生物生态防控国家重点实验室/福建农林大学应用生态研究所/福建农林大学教育部害虫生态防控国际合作联合实验室/福建农林大学农业农村部闽台作物有害生物综合治理重点实验室/海峡两岸特色作物安全生产省部共建协同创新中心，福州 350002

【】RNA甲基化是基因转录后水平表观修饰的主要形式，参与了众多重要的细胞学过程。小菜蛾（）是危害十字花科蔬菜的重要寡食性害虫，与RNA甲基化相关基因的功能尚未见报道。本研究通过克隆小菜蛾的RNA甲基化蛋白同源基因，鉴定其表达模式，并敲除该基因以探究其生物学功能。通过小菜蛾基因组网站查找基因序列，PCR扩增其蛋白质编码序列（CDS）；采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术，检测小菜蛾不同发育阶段个体以及成虫生殖腺中的相对表达量；运用CRISPR/Cas9结合卵的显微注射技术，对小菜蛾进行编辑；将被编辑过的成虫与野生型成虫杂交，并对其产生的后代进行近交，筛选突变品系；观测并比较突变体与野生型个体遗传特性、生物学参数和表型的差异，明确的功能。克隆得到长度为912 bp的CDS，在雌蛹、雌成虫和卵中的表达量较高，雄成虫和雄蛹的表达量较低，幼虫期的表达量最低，成虫卵巢中表达量显著高于精巢。通过向小菜蛾的卵注射靶向的向导RNA（sgRNA）和Cas9蛋白的混合物，对所产生的阳性后代进行10代的单对近交筛选，获得3种杂合的移码突变品系，分别缺失了4个（Δ213-4）、5个（Δ213-5）和7个（Δ214-7）碱基。……