张宗煜

(1. 天津市工业微生物研究所有限公司 天津 300462；2. 天津实发中科百奥工业生物技术有限公司 天津 300462；3. 天津市工业微生物工程技术中心 天津 300462；4. 天津市工业微生物企业重点实验室 天津 300462；5. 天津量信检验认证技术有限公司 天津 300462)

1 反应历程的探究

1.1 异常情况的发现

在实验室中，测定粗多糖含量采用的是NY/T 1676—2008的苯酚-硫酸法。该方法的原理：多糖在浓硫酸作用下，先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛(糠醛)衍生物，与苯酚反应生成橙黄色溶液，在490 nm处有特征吸收，与标准系列比较定量[1]。在实际工作中，偶尔出现过一些异常情况，如：同一个样品测定的2个结果不平行，标准曲线的R2偏低等。分析了这些问题产生的可能原因，为了验证这些想法是否正确，并探究这个反应的历程，设计了一些试验。

1.2 试验药品与仪器

试验药品：葡萄糖(分析纯)，天津市江天化工技术有限公司；苯酚(分析纯)，东方化工厂；浓硫酸(分析纯)，利安隆博华(天津)医药化学有限公司；蒸馏水，自制。

试验仪器：U-3010紫外可见分光光度计，日本日立公司。

1.3 试验部分

将葡萄糖用蒸馏水配制成0.1 g/L水溶液、苯酚用蒸馏水配制成5%水溶液，加入的各种物料的体积：1 mL 0.1 g/L葡萄糖水溶液，1 mL 5%苯酚水溶液，5 mL浓硫酸，比色以蒸馏水为空白。表1中试验序号1～4均是加完前2种物质并混匀后，放置24 h再加入第3种物质，其余试验则是加完前两种物质并混匀后，立刻加入第3种物质。所有物质都加完后静置10 min，使用涡旋震荡器使反应液充分混合，然后“室温”反应20 min，490 nm测吸光度(表1)。……