王蓓 代聪伟 李娜 杨艳艳 秦英

(河北省人民医院妇科，河北 石家庄 050051)

NDRG1基因，也称为Drg-1,Cap43,RTP,Rit42 and PROXY-1，属于NDRG基因家族。这个家族由四个基因组成：NDRG1，NDRG2，NDRG3，NDRG4。其余三个基因与NDRG1是同源性基因，有57%～65%相似性〔1〕。NDRG1，是43 kD蛋白，由394个氨基酸组成，广泛存在于多细胞生物的正常细胞和肿瘤细胞的细胞质中〔2〕。NDRG1表达与肿瘤发生、发展及转移关系的相关研究表明：NDRG1在抑制肿瘤转移的过程中发挥着重要的作用〔3,4〕。但有关该方面的研究报道目前仍不多，而且也存在较大争议。NDRG1表达与肿瘤尤其在卵巢肿瘤转移的相关性如何，目前国内外尚未发现关于NDRG1与卵巢癌细胞OVCAR3的研究报道。本研究采用分子生物学方法，改变卵巢癌细胞OVCAR3中NDRG1的表达，分析其对卵巢癌细胞周期和凋亡的影响。

1 材料与方法

1.1细胞株 人卵巢癌OVCAR3细胞株中国医学科学院肿瘤医院提供。

1.2试剂及仪器 细胞培养基RPMI1640、胎牛血清购自Sigma公司，Trizol试剂及LipofectamineTM 2000、RNA提取试剂购自Invitrogen 公司，Transwell小室购自Costar公司，RT-PCR试剂盒及引物购自Takara公司。质粒pcDNA3.1(+)/NDRG1和pcDNA3.1(+)为Clontech合成。

1.3细胞培养 OVCAR3细胞培养于37℃含5%CO2细胞培养箱内,培养液为含10%胎牛血清的RPMI1640，0.25%胰蛋白酶消化传代，倒置显微镜下观察细胞生长状态。

1.4实验方法

1.4.1细胞转染 细胞在RPMI1640培养液于37℃、5%CO2饱和湿度的培养箱中培养生长。转染前1 d,胰酶消化细胞并计数,4×105/孔细胞接种于6孔板,当细胞融合度为80%时即可转染。转染时,按照Lipofectamine 2000(Invitrogen公司)说明书进行转染,实验分3组：未转染组(control组)，阴性对照组〔pcDNA3.1(+)组〕，实验组〔pcDNA3.1(+)/NDRG1组〕。

1.4.2荧光定量PCR检测NDRG1在OVCAR3细胞中的表达 按 Trizol试剂盒说明书分别提取转染后48 h未转染组(control组)，阴性对照组〔pcDNA3.1(+)组〕，实验组〔pcDNA3.1(+)/NDRG1组〕细胞的总RNA。……