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以cytC基因为靶标的LAMP快速检测番茄溃疡病菌方法的建立

2021-07-26刘燕妮毛芙蓉范慧冬郑士金侯柏森

江苏农业科学 2021年11期
关键词:检测

刘燕妮 毛芙蓉 范慧冬 郑士金 侯柏森

摘要:以番茄细菌性溃疡病病菌的特异性基因cytC为检测靶标,以番茄溃疡病病菌等8种病原细菌为供试菌株。根据检测靶标设计环介导等温扩增(LAMP)引物并进行特异性和灵敏度检测。结果显示,引物cytC-170能特异性检测出番茄溃疡病病菌,检测灵敏度高达5×105 copy/μL,环引物的加成将试验进程缩短为33.06 min,使整个反应控制在50 min内。研究建立的LAMP检测方法操作简单,结果可视,非常适用于番茄细菌性溃疡病病菌的现场快速检测。

关键词:番茄溃疡病病菌;LAMP;特异性;检测;cytC基因;加环试验

中图分类号:S436.412.1+9   文献标志码: A

文章编号:1002-1302(2021)11-0072-04

收稿日期:2020-09-01

基金项目:吉林省重点科技攻关项目(20140204032NY)。

作者简介:刘燕妮(1988—),女,山东青岛人,硕士,助理研究员,研究方向为蔬菜病害综合防治。E-mail:704870590@qq.com。

通信作者:毛芙蓉,硕士,副研究员,研究方向为蔬菜病虫害综合防治。E-mail:5155885@qq.com。

番茄细菌性溃疡病病菌是我国禁止入境的检疫性有害微生物,1954年我国首次报道该病害,之后便迅速蔓延,现在在黑龙江、吉林、山东、辽宁、河北、四川等地均有发生,每年给番茄带来25%~75%的经济损失,严重制约着番茄产业的发展。番茄细菌性溃疡病由密执安棒状杆菌密执安亚种(Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis,以下简称为Cmm)引起,除侵染番茄外,还可侵染辣椒、裂叶茄、龙葵、烟草、天仙子等47种茄科植物[1-2]。这些植物的病残体都可作为病害再次流行的初侵染源。有关报道表明,当番茄体内的病菌浓度达到1×108~1×109 CFU/mL时,番茄就会表现出被害症状[3],当番茄种子的带菌率达1%以上时,便可引起病害的快速流行[4-5]。……

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