张二豪 张杰

摘要：近年来的研究显示，CRISPR/Cas9系统是强有力的基因编辑新技术。以蝗绿僵菌为试验对象，以同源重组敲除系统为对照，研究CRISPR/Cas9系统敲除蝗绿僵菌的基因isp4核苷酸序列。阐明了CRISPR/Cas9载体构建的方法，比较了CRISPR/Cas9和Recombinase敲除技术的异同，最后通过PCR和突变菌株的表型验证了CRISPR/Cas9系统能够应用于绿僵菌。结果表明，CRISPR/Cas9在昆虫病原真菌绿僵菌中是有效的基因编辑技术。

关键词：CRISPR/Cas9;重组酶;基因编辑;绿僵菌

中图分类号： S188  文献标志码： A

文章编号：1002-1302（2021）11-0048-06

收稿日期：2020-10-09

基金项目：周口师范学院高层次人才科研启动经费研究项目（编号：2018B180061）;西藏自治区自然科学基金 （编号：XZ2018ZRG-19）。

作者简介：张二豪（1989—），男，河南平顶山人，硕士，讲师，主要研究方向为分子生物学。E-mail：1158496424@qq.com。

通信作者：张 杰，博士，讲师，主要研究方向为分子生物学与生物工程。E-mail：Zhangjiezk@qq.com。

分子遗传修饰和基因工程技术需要精确地改变基因组的核苷酸序列。随着基因修饰新技术的不断发展，某些基因可被敲除或被降低表达水平[1]，这些技术为基因功能的研究提供了便捷的途径。基因编辑就是对细胞基因组中目的基因的核苷酸序列甚至是单个核苷酸进行替换、切除，增加或者是插入外源的DNA序列，使之产生可遗传的改变，进而研究其功能的手段[2]。绿僵菌的研究已有135年的历史[3]，它作为一个昆虫病原真菌的模式丝状真菌，常常用来研究真核细胞的生物学过程、基因的相关表型和侵染昆虫致病的过程。

为了更好地研究病原真菌的基因特征，多种基因操作技術已经在绿僵菌研究中应用[4]。……