严宝飞，段金廒，张景正，刘圣金，刘 嘉*，毛艺蓓，曾庆琪, 3

忍冬藤提取物诱导骨肉瘤细胞凋亡的作用及机制研究

严宝飞1, 2，段金廒2，张景正1，刘圣金2，刘 嘉1*，毛艺蓓1，曾庆琪1, 3

1. 江苏卫生健康职业学院，江苏 南京 211800 2. 南京中医药大学 江苏省中药资源产业化过程协同创新中心，中药资源产业化与方剂创新药物国家地方联合工程研究中心，国家中医药管理局中药资源循环利用重点研究室，江苏 南京 210023 3. 南京中医药大学第一附属医院，江苏 南京 210029

研究忍冬藤提取物对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的作用及机制。采用超高效液相色谱-飞行时间质谱联用技术（UPLC-Q-TOF/MS）表征忍冬藤提取物的化学成分；采用MTT法检测忍冬藤提取物对人骨肉瘤细胞HOS、143B以及人肾皮质近曲小管上皮细胞HK-2存活率的影响；采用荧光显微镜观察忍冬藤提取物对HOS、143B细胞凋亡的影响；采用Annexin V/PI双染法检测忍冬藤提取物对HOS细胞凋亡的影响；采用JC-1染色法检测忍冬藤提取物对HOS细胞线粒体膜电位的影响；采用Western blotting法检测忍冬藤提取物对HOS细胞B细胞淋巴瘤2相关X蛋白（bcl-2 associated X，Bax）、B细胞淋巴瘤2（B cell lymphoma-2，Bcl-2）、活化的半胱氨酸蛋白酶-3（cleaved Caspase-3）、活化的多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（cleaved poly ADP-ribose polymerases，cleaved PARP）、cleaved Caspase-9和细胞色素C（cytochrome-c，Cyt-C）蛋白表达的影响。忍冬藤提取物中鉴定出有机酸类、三萜皂苷类、黄酮类、环烯醚萜类和氨基酸类5种类型的36种化学成分。忍冬藤提取物抑制HOS和143B细胞存活率，显著诱导HOS细胞凋亡（＜0.01），Caspase-3抑制剂Z-VAD-FMK显著抑制忍冬藤提取物诱导的HOS细胞凋亡（＜0.05、0.01）；忍冬藤提取物显著提高HOS细胞Caspase-3活性（＜0.01），显著改变……