董晓茜，鄢长余，姜范成

（1 辽宁省中医药研究院，辽宁 沈阳；2 大连市检验检测认证技术服务中心，辽宁 大连）

0 引言

三七为五加科植物三七的干燥根及根茎，具有散瘀止血、消肿定痛的作用。临床主要用于咯血、吐血、便血、崩漏、外伤出血、胸腹刺痛、跌扑肿痛[1]。心可舒胶囊原质量标准收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第二册[2]，标准中对三七药材的质量无有效的控制，因此本实验参考相关文献[3-8]对三七中的有效成分进行了相关研究，制定了相应的含量测定方法，以期对三七药材的质量进行控制。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Waters2489/2695 液相色谱仪；Sartorius BP211D、SartoriusBP221S 电子天平。

1.2 试剂与试药

三七皂苷R1（110745-201921，90.4%）、人参皂苷Rg1（110703-201933，98.9%）、人参皂苷Rb1（110704-202028，93.1%）对照品来自中国食品药品检定研究院；甲醇、乙腈均为色谱纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 含量测定

2.1.1 色谱条件

采 用Thermo SCIENTIFIC-C18（4.6mm×250mm，5μm）色谱柱，以乙腈（A）-水梯度洗脱(0-20min，20A →36A；20-27min，36A →20A)；检测波长:203nm；流速:1.0ml/min；柱温:30℃。

2.1.2 溶液的制备

（1）对照品溶液

精密称取三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1对照品适量，分别置100ml 量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液，分别精密量取三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1对照品储备液1ml、4ml、4ml，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，作为混合对照品溶液。

（2）供试品溶液

取本品10 粒内容物，精密称定，研细，混匀，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流1h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

（3）阴性样品溶液

取缺三七的阴性样品，按“2.1.2.2”项下的方法制备阴性样品溶液并进行测定，记录色谱图，结果阴性无干扰（见图1-图3）。

图1 Sp 图

图2 阴性图

图3 St 图

2.2 方法学验证

2.2.1 线性范围的考察

精密吸取对照品溶液，分别制成每1ml 含5μg、10μg、20μg、40μg、80μg、100μg 的溶液。在上述色谱条件下分别进样测定。以质量浓度（X，mg/ml）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，见表1。

表1 不同成分的线性关系

2.2.2 精密度考察

取同一供试品溶液连续进样6 次，测得峰面积的RSD为0.8。结果表明，仪器精密度良好。

2.2.3 稳定性考察

取同一供试品溶液，分别于0、2、4、6、12、24h 进样测定。测得峰面积的RSD 为0.9。结果表明供试品溶液中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1三种成分在24h 内稳定性良好。

2.2.4 重复性考察

取同一批供试品，平行制备6 份供试品溶液，测定，记录各组分色谱峰面积。含量测定结果RSD 为0.8%。

2.2.5 加样回收率试验

取已知含量的心可舒胶囊约0.25g，精密称定，共6 份，分别加入三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1对照品储备液0.5ml、3ml、2ml，按“2.1.2”项下（2）方法制备供试品溶液，测定，计算加样回收率。结果三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的平均回收率(n=6)分别为99.3%、99.3%、99.3%，RSD 为1.0%、0.8%、0.5%。见表2。

表2 加样回收率试验结果(n=6)

3 讨论

3.1 提取溶剂和方法的选择

为了兼顾3 种成分的溶解性，参考中国药典的提取方法，本试验对甲醇以及不同比例的甲醇-水溶液进行了考察，结果表明3 种成分在甲醇提取情况下，提取效率较高，杂质峰较少，因此选择甲醇作为提取溶剂。由于该制剂中三七为原药材粉碎直接入药制成胶囊，因此比较了加热回流和超声提取两种方式对提取效率的影响，结果显示加热回流的效果要好于超声提取。并对加热回流的时间进行了考察，最终确定甲醇溶液加热回流提取1h 作为提取方法。

3.2 流动相的选择

由于皂苷类成分极性较大，色谱分离需要时间较长，本试验参考相关文献及《中国药典》2015 年版一部人参、三七药材项下，以及含有三七药材的中成药等相关项下，试验了多种等度、梯度的流动相系统，最后根据色谱时间、分离度、理论塔板数、基线漂移等方面综合考虑，最终确定了“2.1.1”项下的流动相系统。