高巍朕，王天祥，张晓鹏，柳宏志

(1.佳木斯大学口腔医学院，黑龙江 佳木斯 154002；2.大庆油田总医院口腔外科，黑龙江 大庆 163001)

口腔鳞状细胞癌(OSCC)是口腔科中最常见的恶性肿瘤之一，其发病率逐年增高。肿瘤标志物的检测对其发生发展及预后判定有一定的作用[1, 2]。有研究证明[3]，程序性死亡分子配体1(PD-L1)与程序性死亡分子1(PD-1)结合后产生免疫抑制，参与肿瘤的发生发展。但OSCC患者癌组织中PD-L1表达水平与临床病理特征之间的关系尚不清楚。本研究旨在检测OSCC组织中的PD-L1的表达水平，并探讨其生物学意义，为OSCC新型治疗方法提供科学依据，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取我院病理科2014-06～2015-01存档的OSCC患者病理组织石蜡标本89例作为实验组，纳入标准：首次接受手术治疗者；术前未经过化疗或其他生物治疗，经常规影像学检查并术后确诊为OSCC患者；无免疫系统疾病者。本研究经过我院伦理委员会同意。其中男47例，女42例；平均(55.3±1.5)岁；肿瘤细胞分化程度：高分化44例，中低分化45例；临床分期：Ⅰ+Ⅱ期46例，Ⅲ+Ⅳ期43例；伴淋巴结转移47例，无淋巴结转移42例。另选取正常口腔黏膜组织标本10例作为对照组。

1.2 方法

将石蜡块用常规方法制成病理切片，并脱蜡脱水进行微波修复抗原，然后采用免疫组化法检测组织中PD-L1表达率。具体步骤按试剂盒说明书进行操作：加一抗：以抗人PD-L1单克隆抗体为一抗，用5% PBS脱脂牛奶稀释一抗成工作浓度，4℃孵育切片过夜，PBS室温洗涤3次；加二抗：用5% PBS脱脂牛奶稀释羊抗鼠酶标二抗成工作浓度，室温孵育切片30 min，PBS室温洗涤3次；显色：用DAB试剂显色，苏木精轻度复染。同时设空白对照和阳性对照，以PBS代替一抗作为空白对照，用已知PD-L1蛋白表达阳性的结肠癌组织石蜡切片作为阳性对照。显微镜下用细胞计数器计数细胞膜上和细胞质内有阳性染色的细胞个数进行组织学分析PD-L1的表达。每张切片选取癌细胞数较多的5个高倍镜视野(×400)，每个视野计数100个细胞。

1.3 观察指标

PD-L1阳性表达判定：染色强度分级如下：无着色记为0分，淡黄色记为1分，棕黄色记为2分，棕褐色记为3分；阳性细胞百分比分级为：阳性细胞≤10%为1分，10%<阳性细胞数<50%为2分，阳性细胞>50%为3分。两项得分相乘≥3为阳性表达。

1.4 统计学方法

采用SPSS 18.0软件进行分析，计数资料以n(%)表示，采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 PD-L1在癌组织不同部位表达情况

免疫组化结果显示，PD-L1阳性表达为细胞中染色呈棕黄色，在细胞膜和细胞质内分布较多，且PD-L1主要表达于癌细胞及癌间质浸润淋巴细胞中。

2.2 PD-L1阳性表达率情况

PD-L1在癌组织中的阳性表达率为87.64%(78/89)，显著高于正常组织的0%(0/10)(χ2=41.316，P<0.01)；PD-L1在癌细胞上的阳性表达率为76.40%(68/89)，癌间质淋巴细胞上的阳性表达率为57.30%(51/89)，差异显著(χ2=7.327，P<0.01)。

2.3 PD-L1表达与OSCC患者临床病理特征的关系分析

PD-L1的表达与OSCC患者的年龄、病灶大小无关(P>0.05)，但与OSCC临床分期、肿瘤分化程度及淋巴转移相关(P<0.05)。临床分期Ⅲ～Ⅳ期患者的PD-L1的阳性表达率明显高于Ⅰ～Ⅱ期患者，差异具有统计学意义(P<0.05)；肿瘤细胞分化程度高者PD-L1阳性表达率高于中低分化者，差异具有统计学意义(P<0.05)；淋巴转移患者PD-L1的阳性表达率高于无淋巴转移患者，差异具有统计学意义(P<0.05)。

表1 PD-L1表达与OSCC患者临床病理特征的关系(例)

3 讨论

OSCC的治疗主要是手术治疗，以放化疗为辅助治疗手段。放化疗可以控制患者病灶的转移，但随后会出现一系列并发症，影响患者生活质量。因此，肿瘤靶向治疗成为研究者目前研究的热点。机体抗肿瘤作用主要通过细胞免疫来实现，而T淋巴细胞在细胞免疫应答中起主要作用。PD-L1与其受体PD-1结合后能抑制T细胞活化并诱导T细胞凋亡，从而介导肿瘤免疫逃逸作用[4]。近年来，越来越多的研究发现，在乳腺癌、肝癌、黑色素瘤患者体内PD-1及PD-L1表达量上升，并与疾病的发生发展有关[5, 6]。本研究结果显示，PD-L1主要表达在癌细胞及癌间质淋巴细胞上。OSCC患者癌组织中PD-L1的阳性表达率显著高于正常组织；癌组织中PD-L1表达与临床分期、肿瘤细胞分化程度及淋巴结是否转移相关，与患者年龄，病灶大小无关，说明PD-L1与OSCC的临床病理特征有一定相关性，本研究样本数量有限，希望进一步的研究中寻找到更多的实验样本，使实验结果得到进一步的确证。综上所述，PD-L1分子与OSCC的发生发展有一定相关性，其有望成为OSCC免疫治疗的新靶点。