奥希替尼联合贝伐珠单抗对EGFR-TKIs耐药H1975细胞增殖的抑制作用及机制研究*

2021-07-13邓镇生田作春许静红

广西医科大学学报 2021年6期

邓镇生，林青，田作春，李才，许静红

（海南省三亚中心医院 1.心胸外科；2.麻醉科，三亚 572000）

化疗、靶向治疗、免疫治疗等是局部晚期或晚期肺癌最主要的治疗措施[1]。尤其是对于EGFR 敏感的突变患者，EGFR-TKIs 可作为一线治疗药物[2]。而且随着三代EGFR-TKIs（如奥希替尼）[3]的出现，进一步增加了非小细胞肺癌（non-small-cell lung carcinoma，NSCLC）患者的临床获益。但是仍有部分患者对奥希替尼敏感性不高或因二次突变而进一步发生获得耐药性[4]。因此有学者提出三代EGFR-TKIs联合其他靶向药物（如抗血管生成药物-贝伐珠单抗）可作为一代或二代EGFR-TKIs治疗耐药后的二/三线选择。本研究旨在分析奥希替尼联合贝伐珠单抗对EGFR 敏感突变和T790M 耐药突变的肺腺癌细胞增殖的协同抑制作用以及对PI3K/AKT/mTOR 通路和AMPK/ERK/mTOR 通路的影响，为临床用药提供可靠的实验证据支持。

1 材料与方法

1.1 实验材料

细胞株：人肺腺癌细胞株NCI-H1975（E21 L858R/E20 T790M）（美国模式菌种收集中心，ATCC号：CRL-5908TM）。

主要试剂与仪器：奥希替尼（Osimertinib，AZD）（Selleck Chem,USA）购自美国公司；贝伐珠单抗（Bevacizumab，BEV）（罗氏公司,瑞士）；RPMI1640培养基（GIBCO,USA）；四甲基偶氮唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）（Sigma,USA）；Annexin V-PE/7AAD细胞凋亡检测试剂盒（博蕾德科技发展有限公司，中国北京）；兔抗人EGFR抗体和p-EGFR抗体（Tyr-1173）、兔抗人蛋白激酶B（protein kinase B，Akt）抗体和兔抗人p-Akt 抗体（Ser 473）、鼠抗人细胞外调节蛋白激酶（extracellular regulated protein kinase，ERK）多克隆抗体和p-ERK 抗体（Thr202/Thr204）、鼠抗人哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）多克隆抗体和pmTOR 抗体（ser2448）、鼠抗人核糖体S6 蛋白激酶（Ribosome S6 protein kinase，p70s6k）多克隆抗体和p-p70s6k 抗体（Thr389）、鼠抗人5-磷酸腺苷激酶（Adenosine 5’-monophosphate (AMP)-activated protein kinase，AMPK）多克隆抗体和p-AMPK 抗体（Thr172）（Abcam,UK）。