徐 刚 ， 马淑慧

(天津农学院动物科学与动物医学学院 天津市农业动物繁育与健康养殖重点实验室 ， 天津 西青 300392)

传染性支气管炎(Infectious bronchitis，IB)是由传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus，IBV)引起鸡的一种急性、高度接触性传染病，目前已流行于全球各地，是危害世界各国家禽养殖业发展的重要动物疫病[1-2]。IBV属于γ冠状病毒属，基因组主要编码4种主要的结构蛋白、4种辅助蛋白以及至少15种非结构蛋白[3-4]。冠状病毒的多种蛋白成分可参与病毒的感染、复制和抵抗机体的抗病毒反应，其中α冠状病毒和β冠状病毒都可以有效地拮抗I型干扰素(Interferon，IFN)的产生[5]。I型干扰素反应是机体先天免疫应答的重要组成部分，主要针对并抵抗病毒的入侵，具有很高的抗病毒活性和广泛的免疫调节作用[6-7]。而对于γ冠状病毒属的IBV来说，病毒与宿主I型干扰素反应的相关性目前研究甚少。

本试验首先通过IBV感染原代鸡胚肾细胞并利用双链RNA类似物poly(I∶C)进行刺激，确定IBV对I型干扰素的抑制作用，然后通过构建IBV的各非结构蛋白真核表达载体，利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)，在DF-1细胞上筛选拮抗I型干扰素的IBV非结构蛋白，并研究其在抑制干扰素生成相关通路中的作用机理，为深入探索IBV的致病机理以及免疫机制提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 IBV毒株与鸡胚 IBV JS株由本实验室分离，经纯化后获得全基因组序列。SPF鸡胚，购自北京勃林格殷格翰维通生物技术有限公司。

1.2 主要试剂、质粒和细胞 DMEM培养基、胎牛血清(Gibco，美国)；Lipofectamine 2000(Thermo，美国)；总RNA提取试剂盒(TP-01111，福际，成都)；……