李豪 姬发祥 徐晓宁 马金华 沈存芳 李进章 王丽娟

(青海大学附属医院肿瘤内科，青海 西宁 810000)

肝癌是临床常见恶性肿瘤且病死率极高，其病理基础较为复杂，目前临床主要采用根治术治疗肝癌但患者术后易复发〔1〕。既往研究显示肝癌靶向药物治疗成为主流，基因及蛋白表达异常与肝癌复发及转移等恶性特征有关〔2〕。因此积极研究基因及蛋白在肝癌发生及发展中的作用可为指导肝癌精准治疗提供参考。微小RNA-645(miR-645)在头鳞癌组织中表达上调并与头鳞癌的转移及预后密切相关，上调miR-645能够增强头鳞癌细胞增殖、侵袭、转移及单克隆形成等能力〔3〕。miR-645在结肠癌及肝癌组织中表达上调，抑制miR-645表达能抑制结肠癌细胞的增殖〔4，5〕。通过生物学信息软件预测内皮素(EDN)3是miR-645的靶基因，而EDN3基因在乳腺癌、宫颈癌、结肠癌及神经胶质瘤等恶性肿瘤中表达水平明显降低并可能作为肿瘤靶向治疗的潜在靶点〔6～9〕。本研究旨在探讨miR-645在肝癌细胞中的表达并采用基因干扰技术抑制miR-645表达，分析miR-645表达量改变对肝癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响，验证miR-645与EDN3的靶向作用关系，旨在为肝癌靶向治疗提供新作用靶点。

1 材料与方法

1.1材料与试剂 肝癌细胞株HepG2、SMMC-7721、BEL-7402与正常肝细胞株L02均购自上海生命科学院细胞库。杜氏改良培养基(DMEM)购自美国Gibco公司；胎牛血清与胰蛋白酶均购自美国Hyclone公司；LipofectamineTM2000转染试剂盒购自上海阳光生物科技有限公司；miR-645 mimic及阴性转染质粒、miR-645抑制剂(anti-miR-645)、anti-miR-NC均购自广州易锦生物技术有限公司；……