黄运伯 陈素玲 黄剑

(海口市人民医院麻醉科，海南 海口 570208)

目前认为术后认知功能障碍(POCD)病理生理机制与神经炎症、氧化应激、细胞凋亡等有关，因此减轻神经炎症、抑制细胞凋亡成为POCD研究途径。Toll样受体(TLR)4/核因子(NF)-κB是介导先天性免疫和炎症反应的通路，且参与海马级联炎症反应〔1〕。七氟烷为临床广泛应用的吸入麻醉剂，被证实可引起POCD的发生〔2,3〕。故本研究建立七氟烷诱导的POCD老年大鼠模型，探讨TLR4/NF-κB信号通路在其中的作用，以期为POCD的机制研究提供参考。

1 材料与方法

1.1实验动物 30只SPF级雄性SD大鼠，20月龄，体重500～600 g，购自中国科学院上海药物研究所，SCXK(沪)2020-0005。

1.2药物、主要试剂 七氟烷(上海恒瑞医药有限公司)，TLR4抑制剂TAK242(北京百奥博莱科技有限公司)，白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒(武汉艾美捷生物科技有限公司)，TLR2、NF-κB p65一抗，辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔IgG二抗(CST中国)。SM2010R徕卡切片机(徕卡显微系统贸易公司)，Varioskan LUX酶标仪、ABI实时荧光定量PCR仪(赛默飞世尔科技中国)、CheniDoc XRS化学发光成像分析系统(美国Bio-rad公司)。

1.3动物分组及七氟烷诱导POCD模型建立 SD雄性大鼠30只，随机分为对照组、模型组、TLR4抑制组，每组10只。模型建立参考文献〔4,5〕，以戊巴比妥钠50 mg/kg腹腔注射麻醉，仰卧固定于脑立体定位仪，TLR4抑制组以TAK242 10 μg侧脑脑室注射，其余大鼠侧脑室予以注射等量生理盐水。侧脑室注射10 min后模型组与TLR4抑制组佩戴4%七氟烷+2 L/min O2通气面罩，经腹部正中做3 cm切口，进行腹腔探查，探查结束后以青霉素16 U/kg腹腔注射，术后置入麻醉箱诱导箱中，箱底铺适量钠石灰，通气流量2 L/min，4%七氟烷，七氟烷共持续吸入3 h。……