张磊 田维毅 王和生 赖陈岑 李妹娟 夏丽 冷传龙

(1贵州中医药大学,贵州 贵阳 550002；2贵州中医药大学第一附属医院中心实验室)

心血管疾病的发生和死亡呈日益增长的趋势，作为其重要病理基础，动脉粥样硬化(AS)的预防与治疗已成为影响人类健康的重点研究对象。AS是脂质在动脉血管内膜大量积聚使外观呈现出黄色粥样硬化斑块，主要累及大、中动脉。病变过程中两个关键环节：脂质积聚和炎症反应，循环往复，相互影响〔1〕，使脂质不断浸润，内膜损伤加剧，最终纤维帽变薄、斑块破损、游离，变成血栓，它是基于脂质浸润和损伤反应理论基础上，进一步发展的慢性炎症疾病〔2〕。本实验希望通过研究制何首乌大黄素通过调控哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路及其通路相关因子磷酸肌醇-3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)来明确其防治AS的发生发展机制，为中医药防治AS，开发有效、低毒副作用的抗AS药物提供理论和实验依据。

1 材料与方法

1.1试验药物和动物 大黄素购自西安飞达生物有限公司；脂多糖(LPS)购自美国Sigma公司；血脂康购自维信生物科技有限公司。6周龄雄性SPF级C57BL/6J小鼠12只，ApoE-/-小鼠72只，体重(20±2)g，均购自贵州医科大学，合格证号编号为SCXK(黔)2012-0001。

1.2试剂 抗mTOR抗体、抗AKT1/AKT2/AKT3抗体、anti-PI3K p85 α抗体、抗mTOR(phospho S2481)抗体均购自美国Abcam公司；RNA纯化试剂盒、蛋白Ladder均购自美国Thermo公司；高效RIPA组织细胞裂解液、苏木素-伊红(HE)染色试剂盒、二喹啉甲酸(BCA)蛋白浓度测定试剂盒、RNAwait、聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)胶促凝剂均购自北京索莱宝生物科技有限公司；免染胶试剂盒12%、7.5%，快转液购自美国BIO-RAD公司。……