黄栌枯萎病菌巢式PCR检测方法的建立
2021-07-06周江鸿车少臣赵正楠
夏 菲,周江鸿,车少臣,仲 丽,赵正楠
(园林绿地生态功能评价与调控技术北京市重点实验室,北京市园林科学研究院,北京100102)
黄栌(Cotinus coggygria)为漆树科(Anacardiaceae)黄栌属(Cotinus)植物,落叶灌木或小乔木,秋季叶色变红,极具观赏价值和经济价值,是北京香山公园秋季红叶景观的主要树种。自上世纪80年代香山发现黄栌枯萎病以来[1],其发生有逐年加重的趋势。该病害导致黄栌叶片萎蔫,同时自叶缘向内发黄,或失水卷曲,但通常不脱落;根、茎的维管束出现坏死,木质部与皮层交界处出现褐色带线,部分树杈迅速死亡,发病严重时可导致整株长势衰弱或死亡。
黄栌枯萎病的病原菌为大丽轮枝菌(Verticillium dahliae),其无性世代属于半知菌亚门(Deuteromycotina)丝孢纲(Hyphomycetes)轮枝孢属(Verticillium),菌落表面常形成黑色微菌核,其温度适应范围较宽,具有耐高温特性[2]。大丽轮枝菌为典型土壤习居菌,土壤中的微菌核萌发产生的菌丝通过黄栌根系表面的伤口侵入维管束,然后产生分生孢子沿维管束随蒸腾流向上扩展[3]。大丽轮枝菌在寄主体内扩展缓慢、潜伏期长,当叶片出现明显萎蔫症状时,其根部及茎干内已经存在大量病原菌[4],使其易错过最佳防治期,造成病害大面积暴发[5]。传统的病原物分离、鉴定技术费时费力,难以对大量苗木进行快速检测,因此建立快速、高灵敏度的黄栌枯萎病菌检测技术对黄栌枯萎病的防治具有重要意义。
基于PCR技术的检测方法具有快速、灵敏等特点,已广泛用于病害的诊断和鉴定。朱有勇等[6]根据棉花黄萎病菌(V.dahliae)核糖体基因ITS区段的碱基编码序列,设计了一对26 bp的PCR特异性扩增引物P1∕P2,用于棉花黄萎病菌的分子鉴定和分子监测。……
