榅桲4CL基因的克隆与生物信息学分析
2021-07-05车玉红郭春苗木巴热克阿尤普吴津蓉
杨 波,车玉红,郭春苗,木巴热克·阿尤普 , 吴津蓉,杜 鹃
(1.新疆农业科学院园艺作物研究所, 乌鲁木齐 830091;2.新疆农业职业技术学院, 新疆昌吉 831100)
0 引 言
【研究意义】榅桲(CydoniaoblongaMill.)是蔷薇科榅桲属植物,具有重要的药用价值和经济价值,新疆主要分布在喀什、阿克苏等地,栽培面积在1 000 hm2以上[1-2]。榅桲果肉高度木质化,作为水果鲜食因木质化的口感而不能被消费者接受[3-4]。【前人研究进展】果肉木质化是木质素在果肉中的沉积过程,与木质素代谢密切相关[5]。在木质素代谢途径中4-香豆酸辅酶A连接酶(4-coumarateCoAligase,4CL)基因是关键酶之一, 是调控苯丙酸途径与木质素前体合成的关键支点和纽带而备受关注[6]。近年来,4CL基因在慈竹[6]、杨树[7]、松树[8]、烟草[9]、非洲菊[10]、芒果[11]、葡萄[12]、枣[13]等多种植物上均已被克隆鉴定出来,对其功能和调控作用进行了系统研究。【本研究切入点】车玉红等已经对榅桲果实中与木质素代谢相关的CAD基因[14]和C4H基因[15]进行了克隆分析,但榅桲4CL基因的序列信息尚不明确。研究榅桲4CL基因的克隆与生物信息学。【拟解决的关键问题】以榅桲果肉为研究对象,研究克隆4CL基因的序列全长,并研究其序列特征,为该基因在榅桲果实发育过程中的作用和功能奠定基础。
1 材料与方法
1.1 材 料
1.1.1 榅 桲
采集地点为新疆喀什地区莎车县伊什库里乡榅桲示范园,供试品种为大果榅桲。采集时间为榅桲落花后40 d(5月21日)的果实。样品采集后迅速用冰块保存送至乌鲁木齐实验室在超低温冰箱-80℃环境下保存备用。
1.1.2 试 剂
大连TaKaRa公司提供实验所需PrimerSTAR DNA聚合酶、M-MLV反转录酶和T4DNA连接酶;……
