韩 雪

（哈尔滨维科生物技术有限公司，黑龙江 哈尔滨 150069）

在鸡痘鹌鹑化弱毒细胞苗的生产中，为了降低成本，获得高效价产品和稳定的病毒培养工艺，通过在接毒方法上进行了试验，取得了相关数据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 SPF鸡胚

由山东济南赛斯提供SPF种蛋，自行孵化10~11日龄，备用。

1.1.2 种毒

鸡痘鹌鹑化弱毒由中国兽医药品监察所提供，经SPF鸡胚扩繁，收获绒毛尿囊膜，各项指标检验合格备用。

1.1.3 培养液

含5%~8%的新生牛血清的乳汉液，青霉素、链霉素（双抗）各100IU/mL，pH值为7.2~7.4。

1.1.4 灭菌生理盐水 由哈尔滨维科生物技术有限公司配药室提供。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养及接毒

按照常规方法制备原代细胞悬液，细胞计数后选择合适细胞浓度，试验组按鸡痘种毒膜毒接毒量由《规程》规定的按总量的0.1%~0.3%接入种毒，调整pH至7.2~7.4。置温室培养。对照组鸡胚成纤维细胞经过24h的培养形成致密的细胞单层后，按培养液量的0.1%~0.3%接入种毒调整pH至7.2~7.4。置温室培养。观察细胞2次/d，观察两组细胞生长状态的不同以及细胞病变（CPE)的形成。

1.2.2 收获

当75%以上细胞产生CPE细胞病变开始收获。将每瓶的培养液留下200mL，经无菌检验合格后放入-18℃冷库冻存。

1.2.3 测毒

分别取两种不同接种方法，收获后无菌检验为阴性的样品，加无菌生理盐水，然后做10倍系列稀释。取10~4、10~5、10~6三个滴度分别接种11日龄SPF鸡胚各5只，每胚绒毛尿囊膜上接种0.2mL，接种后观察96~120h，观察感染情况。根据死胚和活胚绒毛尿囊膜出现水肿、增厚或有灰白色痘斑判为感染，并计算出EID50。

2 结 果

将鸡痘毒用不同稀释倍数不同稀释方法接种鸡胚后120h，观察发现，鸡胚绒毛尿囊膜都出现了典型的水肿、增厚、痘斑等病变。……