刘 祎，景明夷，白艾灵，韦 婷，蔡定均

(成都中医药大学针灸推拿学院 成都 610036)

择时针刺是广受关注的一种针刺疗法，其效应与穴位局部结构及功能状态变化密切相关[1]。穴位区域成纤维细胞可感知针刺等机械刺激并将其转换为机体可识别的生物信号，继而引发多种生物学效应[2-4]。不同时间针刺穴区成纤维细胞出现的变化不一。我们前期研究发现，在ZT0(7：00)、ZT4(11：00)、ZT8(15：00)、ZT12(19：00)、ZT16(23：00)、ZT20(3：00)时间点针刺足三里穴，穴区成纤维细胞横截面积增大，呈圆梭形排列，骨架重构不同，其中以ZT8最明显[5]。ZT8时间点针刺穴区成纤维细胞发生改变的同时，其细胞膜上P2X7受体也发生明显变化[6]。MAPK相关信号通路被证明在细胞骨架中的微管、微丝和中间纤维等结构的调节中发挥重要作用[7-10]，p38MAPK及其磷酸化改变是其中的关键环节之一。在经典炎性疼痛模型下，我们已证明ZT8时间点针刺可调节野生型小鼠穴区p38MAPK表达量[6]，故本实验选用P2X7-/-小鼠建立炎性疼痛模型，观察ZT8针刺足三里对穴区p38MAPK表达的影响，以明确P2X7受体是否通过p38MAPK信号通路介导择时针刺对成纤维细胞骨架的重构。

1 材料

1.1 动物

P2X7-/-小鼠18只，雌雄皆可，体质量20±2 g，10-14周龄，自JAX实验室引进，购买于北京维通利华实验动物技术服务公司。实验在成都医学院SPF级实验室进行，每Optimice 100 EVC笼具内饲养5-7只动物。自动光－暗控制[L:D为12:12，即07:00-19:00光照(light，L)，19:00-07:00暗置(dark，D)]，笼具内隔音、通风、恒温(22-24℃)，相对湿度50%-60%。所有动物均饲以SPF级颗粒饲料与灭菌水，并由成都医学院实验动物中心提供。

1.2 试剂

ECL发光试剂盒(批号：BL520A，美国Thermo公司)，预染蛋白Marker(批号：00215343，美国NEB公司)，PVDF膜(美国Hybond公司)。……