ASFV解旋酶D1133L蛋白表达和抗体检测方法的建立及初步应用
2021-07-02申超超张大俊史喜绢杨泽晓张克山郑海学刘湘涛
侯 景,申超超,张大俊,杨 博,史喜绢,张 婷,杨泽晓,张克山*,郑海学*,李 丹,党 文,刘湘涛
(1.四川农业大学 动物医学院,四川 成都 611130;2.中国农业科学院 兰州兽医研究所 家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业农村部 畜禽病毒学重点开放实验室/国家口蹄疫参考实验室,甘肃 兰州 730046)
非洲猪瘟(African swine fever, ASF)是由ASF病毒(ASFV)引起的猪的一种急性、热性、高度接触性传染病。ASFV属非洲猪瘟病毒科(Asfarviridae),是虫媒病毒中唯一的DNA病毒[1,2]。ASF的临床症状和病理变化与猪瘟很相似,表现为发热、皮肤发绀和淋巴结、肾、胃肠黏膜明显出血,强毒株感染的病死率可高达100%[3]。非洲猪瘟于1921年在肯尼亚被首次报道,随后发生在非洲的南部、中部和西部;自20世纪中期起该病在欧洲和拉美一些国家广泛流行,造成了严重的经济损失,因而被世界动物卫生组织(OIE)列为实时通报的动物疫病,我国将其列为一类动物疫病[4]。早在1995年西班牙科学家发现了ASFV P54蛋白反应性非常好,并将P54融合到大肠杆菌MS2聚合酶的N端,因其特异性强,利用Western Blot技术检出了ASFV[5]。近几年,研究发现在毕赤酵母中真核表达P72并建立的间接ELISA检测方法效果也不错[6]。此外,原核表达P30所建立的间接ELISA也获得了较好的免疫原性[7]。ASFV血清学检测方法主要有酶联免疫吸附试验、双抗体夹心ELISA法、直接免疫荧光试验、间接免疫荧光试验、免疫印迹试验、胶体金免疫层析法、荧光量子点免疫层析法等[8-12]。
ASFV编码150~200个蛋白,其中包含5个解旋酶。D1133L蛋白是ASFV解旋酶之一,位于病毒基因组中心,其开放阅读框(Open Reading Frame, ORF)全长3402 bp,可编码非常保守的氨基酸序列[13]。……
