孙宁，于娟，余柏增，陈勇，曹进，黄红娟，王卫萍，张立平，李晓军,3(. 东部战区总医院基础医学实验室，南京 000；. 南京市溧水区人民医院检验科，南京00；3. 南京大学生命分析化学国家重点实验室，南京 000)

近年来，临床分离革兰阴性杆菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药率逐年升高[1-2]。菌株对碳青霉烯耐药机制主要有3种，产碳青霉烯酶，药物作用靶点的改变，膜通透性降低及外排作用[1-2]，其中产碳青霉烯酶是最主要机制。目前已有多种碳青霉烯酶被发现，其中KPC、NDM、OXA-48、VIM和IMP在世界范围内广泛分布[3]。临床实验室对细菌耐药性检测多以表型分析进行。近年来，以PCR为基础的核酸扩增技术逐渐用于碳青霉烯酶基因的检测，如实时荧光PCR和多重PCR。此外，一些商业化的试剂已被用于碳青霉烯酶基因检测，如Xpert Carba-R[4-5]。为准确分析革兰阴性杆菌碳青霉烯类耐药机制，监控院内感染的传播，本研究建立一种单管多重PCR联合毛细管电泳(multiplex PCR combined with capillary electrophoresis, mPCR-CE)方法同时检测blaNDM、blaVIM、blaKPC和blaOXA-484种碳青霉烯酶基因，并对该方法进行评价。

1 材料与方法

1.1菌株 采用东部战区总医院基础医学实验室微生物室保存的产碳青霉烯酶临床分离株[6]作为阳性对照菌株，包括：携带blaVIM恶臭假单胞菌(P.putida)，携带blaNDM-1肺炎克雷伯菌(K.pneumoniae)和携带blaKPC-2K.pneumonia(ATCC BAA-1705)，携带部分blaOXA-48基因序列的大肠埃希菌E.coli(DH5α)由人工合成，以及携带其他β-内酰胺酶(TEM-1、CTX-M-5和SHV-1)基因的大肠埃希菌，携带MIR-1基因的肺炎克雷伯菌，分别携带IMP-4和IMP-9基因的铜绿假单胞菌、弗劳地柠檬酸杆菌，以上类型菌株各1株。收集东部战区总医院2019年2—3月间采用……