李原野 陈世界 林华 张婧 安薇 陈瑛琪 张继宗 朱玲

摘要： 为建立能灵敏、高效、准确诊断猪圆环病毒3型（PCV3）的检测方法，并运用该方法研究PCV3传播特性及组织嗜性，根据GenBank中PCV3 ORF2基因（MF631813.1）的核苷酸序列，设计合成PCV3的引物和探针，通过退火温度以及引物、探针用量和特异性等优化，建立了PCV3微滴式数字PCR检测方法。试验结果表明建立的猪圆环病毒3型微滴式数字PCR检测方法具有较好高的灵敏性、重复性和特异性，最低能检测到1 μl 16.35拷贝的质粒标准品，可用于猪圆环病毒3型的早期诊断。

关键词： 猪;圆环病毒3型;微滴式数字PCR

中图分类号： S852.65+9.2  文献标识码： A  文章编号： 1000-4440（2021）02-0389-08

Abstract： To establish a detection method that can diagnose porcine circovirus type 3 （PCV3） sensitively， efficiently and accurately and can be used to explore the transmission characteristics and tissue tropism of PCV3， the primers and probes of PCV3 were designed and synthesized according to the nucleotide sequence of PCV3 ORF2 gene （MF631813.1） in GenBank and the annealing temperature， primer and probe dosages and specificity of droplet digital PCR were optimized to establish droplet digital PCR detection method for PCV3. The results showed that， the established droplet digital PCR detection method for porcine circovirus type 3 with high sensitivity， reproducibility and specificity could detect a minimum of 16.35 copies/μl of plasmid standards. The method established in this study can be used for the early diagnosis of the porcine circovirus type 3.

Key words： pig;circovirus type 3;droplet digital PCR

豬圆环病毒3型（Porcine circovirus type 3，PCV3）能够引起繁殖障碍、皮炎肾病综合征、心脏及全身多系统衰竭综合征、淋巴组织病变以及渐行性消瘦等多种病症[1]。目前，圆环病毒家族中的猪圆环病毒2型和猪圆环病毒3型具有致病性[2]，国内外多地区均检测出PCV3[3]。PCV3流行广泛，感染后发病率高，死亡率较低，因此常常伴发其他的病毒性疾病和细菌性疾病的混合感染。最近报道，在羚羊[4]、狍子[5]和蜱中检测出PCV3[6-7]。总之，PCV3可以感染猪[8]、野猪[9]、牛、小鼠、狗和蜱等动物，有宿主广泛性特点，这为PCV3的跨物种传播提供了条件。因此，野生动物可能成为PCV3的潜在宿主，并对养猪业造成威胁。据报道PCV1和PCV2可以感染人体细胞[10]，而PCV3是否能够感染人体细胞需要进一步研究。PCV3自然感染后主要攻击猪的免疫系统，尚无特效药物以及疫苗。因此，对PCV3的早期带毒检测是防控PCV3最有效的方式。

目前实验室常用的检测方法包括荧光定量PCR、普通PCR等都存在局限性。……