猪瘟病毒化学发光抗体检测方法的建立与应用
2021-06-30石正旺罗俊聪王丽娟曹丽艳周改静郑海学陈轶霞
麻 园,石正旺,罗俊聪,杨 波,王丽娟,万 颖,宋 锐,曹丽艳,周改静,田 宏,郑海学*,陈轶霞*
(1.西北民族大学生命科学与工程学院,兰州 730030; 2.中国农业科学院兰州兽医研究所 国家重点实验室,兰州 730046)
猪瘟(classical swine fever, CSF)是由猪瘟病毒(classical swine fever virus, CSFV)引起的一种急性、热性、高度传染性的猪病毒性疾病[1-2]。世界动物卫生组织(Office International Des Epizooties, OIE)将其列为须通报疫病,我国将其列为一类动物疫病。CSFV是黄病毒科(Flaviviridae)瘟病毒属(Pestivirus)成员之一,是一种有囊膜的单股正链RNA病毒,基因组大小约12.5 kb[3-4]。CSFV基因组含有一个开放阅读框,编码1个含3 898个氨基酸的多聚蛋白,该多聚蛋白被病毒和宿主细胞蛋白酶加工成12个成熟蛋白,包括4个结构蛋白(C、Erns、E1、E2)和8个非结构蛋白(Npro、p7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A、NS5B)[5-7]。E2蛋白是CSFV的囊膜糖蛋白,也是CSFV的主要保护性抗原蛋白,去糖基分子量为42 ku,用E2蛋白免疫猪时,可刺激宿主机体产生中和抗体从而提供针对CSFV的免疫保护[8-9]。
猪瘟是世界范围内流行的猪病毒性疾病,该病的高发病率和高死亡率对猪养殖业造成了巨大的经济损失,尽管有些地区已经根除,但在根除和流行的边界地区及一些野猪群中仍然存在猪瘟的点状散发流行[10]。因此,猪瘟仍是危害全球养猪业的一个重要流行性疾病。在预防猪瘟方面,早期检测对防制该病的暴发至关重要。目前,病毒中和试验(VNTs)、荧光抗体试验(FATs)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、病毒分离、逆转录链式聚合酶反应(RT-PCR)等均是OIE官方推荐的CSFV诊断方法[11-13],其中,ELISA是CSFV血清学诊断中最为主要的方法,但传统的ELISA操作时间较长,不能满足临床高通量快速检测的要求。……
