肖叶懿，郜重丞，包文斌,2，吴正常,2*，吴圣龙,2*

(1．扬州大学动物科学与技术学院，扬州 225009； 2. 教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室，扬州 225009)

RNA修饰发生在转录后水平，包括100余种调控方式，其中RNA甲基化是RNA修饰的主要方式[1]。RNA甲基化与DNA甲基化类似，都是以S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosyl methionine, SAM)为甲基供体，在一系列酶的作用下，将甲基催化转移到其他化合物的过程[2]。近年来，陆续发现一系列RNA甲基化修饰方式，6-甲基腺嘌(N6-methyladenosine，m6A)、5-甲基胞嘧啶(N5-methylcytosine，m5C)、1-甲基腺苷(N1-methyl-adenosine，m1A)是较为常见的类型[3]，其中对m6A的研究较为深入。肾母细胞瘤1-相关蛋白(Wilm’s tumor 1-associated protein，WTAP)是m6A甲基化转移酶复合物的核心组分之一。现有大量研究表明，WTAP基因的表达紊乱能够造成m6A甲基化调控失衡，与人类多种肿瘤通路的抑制和激活有关[4-8]；m6A甲基化修饰还与动物的生长发育以及疾病的发生和调控密切相关，然而在猪WTAP基因功能的报道较少。

断奶仔猪腹泻病(post-weaning diarrhoea, PWD)是造成仔猪死亡的主要原因之一，其中，F18大肠杆菌(E.coliF18)是引起仔猪细菌性腹泻的主要病原菌之一。目前，已有相关研究从DNA甲基化修饰水平阐述了仔猪细菌性腹泻的调控机制[9-10]，而在m6A RNA甲基化水平上尚无相关报道。本研究在个体水平上利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测WTAP在断奶苏太仔猪E.coli抗性型与敏感型个体肠道组织的差异表达情况，并且在细胞水平上利用大肠杆菌F18ab、F18ac刺激和内毒素LPS诱导猪小肠上皮细胞系IPEC-J2，检测处理前后WTAP基因mRNA表达水平的变化。同时，为了进一步探究WTAP基因表达水平与F18大肠杆菌感染的关系，本研究构建并获得了RNA干扰WTAP基因的猪小肠上皮细胞系，并通过大肠杆菌菌毛定量和菌落计数试验以及间接免疫荧光检测沉默WTAP基因对猪小肠上皮细胞大肠杆菌(F18ab、F18ac)黏附能力的影响。……