吴晓昊 陶楚 姚青 伏学坤 梁超 曹惠玲肖国芝

Kindlin 家族蛋白是能够激活整合素胞内区并参与粘着斑（focal adhesion）形成的一类蛋白[1-3]。在哺乳动物细胞中，共有三种Kindlin 蛋白，即分别由Fermt1、Fermt2 和Fermt3 基因编码的Kindlin-1，2 和3[4-5]。虽然Kindlin 家族蛋白具有高度相似的结构特征，但研究表明三种Kindlin 蛋白具有不同的组织表达特异性[6]。现有实验证据显示Kindlin家族蛋白可在多种器官组织中发挥重要功能[7-11]。目前已知Kindlin-1 主要表达于皮肤及小肠等上皮组织中[6，12]，然而Kindlin-1 在骨关节相关组织中的表达情况仍不清楚。本研究收集了健康及疾病状态下的骨关节组织样品，针对性研究了Kindlin-1 在健康及疾病状态下在骨关节组织中的表达情况及相关潜在功能。

1 材料与方法

1.1 实验动物、主要仪器及试剂

健康的SPF 级C57BL/6 和DB1/J 雄性小鼠用于实验，所有动物实验均通过南方科技大学实验动物中心伦理审核（SUSTC-JY2020120，SUSTech-JY2020202）。主要仪器：YB-6LF 石蜡包埋机、TST1200 包埋专用冷台、电热鼓风干燥箱（上海一恒科学仪器有限公司）；RM2255 石蜡切片机（Leica 公司，德国）；SP8 共聚焦显微镜（Leica 公司，德国）；细胞培养箱（Thermo Fisher 公司，美国）；超净工作台（Thermo Fisher 公司，美国）。主要试剂：Kindlin-1 抗体（Sigma 公司，美国，SAB4200465）；CD31 抗体（Abcam 公司，美国，ab28364）；Endomucin 抗体（Abcam 公司，ab106100）；DMEM 培养基（Thermo Fisher 公司，美国，11965092）；胎牛血清（Thermo Fisher 公司，美国，16140071）；Lipofectamine RNAiMAX 转染试剂（Thermo Fisher 公司，美国，Cat#13778075）。

1.2 内侧半月板失稳定术诱导性关节炎

选取6 只2 月龄的健康C57BL/6 雄性小鼠，常规麻醉，于右下肢髌骨内侧行约1 cm 纵行切口，曲屈关节并使髌骨向外侧脱位，从而暴露关节腔。用显微镊移除脂肪垫，并用显微剪刀切断内侧半月板，缝合切口。于左下肢行假手术作为对照，即只暴露关节腔，不切断内侧半月板。……