谭小艳，马耀华，郝兆祥

(1 枣庄学院生命科学学院，山东枣庄，277160；2 枣庄市石榴研究中心，山东枣庄，277300)

石榴为落叶灌木或小乔木，适应性强，原产于伊朗、阿富汗和印度等西亚地区，现在世界各地广泛栽培[1]。近年来，石榴种质资源及其分子标记的研究[2-5]、石榴重要性状基因的克隆[6-8]、EST文库的构建成为石榴分子生物学研究方面的热点。而高质量DNA、RNA的提取是分子生物学研究的必要步骤。幼嫩叶片DNA提取的研究有较多报道[9-11]，但石榴成熟叶片的DNA提取方法的报道较少[4，12-13]，且获得的DNA产量低，实验的可重复率较低，对石榴种质资源研究和其他分子生物学操作带来很大的不便。从幼嫩、新鲜叶片中提取DNA材料，受季节限制而取样时间短。由于成熟石榴叶片中多糖和酚类物质[9，14]较幼嫩组织中多，这些物质与DNA结合程度较高，增加了DNA的提取难度。因此本实验针对常用于植物DNA提取方法——CTAB提取法，进行多次改良研究，探讨适合石榴成熟叶片DNA提取的方法，为石榴种质资源及分子生物学方面的研究打下坚实的基础。

1 材料与方法

1.1 材料

以成熟石榴叶作为实验材料，材料来源于峄城中国石榴种质资源圃，于2018年8月采集(见表1)，冷冻保存于-80 ℃冰箱。

表1 石榴叶片编号、品种、花色

1.2 石榴叶片基因组DNA的提取

从采集的20个石榴品种叶片中抽取前5个品种进行研究。

1.2.1 改良CTAB Ⅰ法 此方法参考赵丽华等人优化的DNA提取方法Ⅱ[12]。①取2 g石榴叶片放入预冷的研钵中，加入0.02 g抗坏血酸(Vc)和0.05 g聚乙烯吡咯烷酮(PVP)于研钵中，用液氮将研……