杨元铭 李笃军 王晓慧 刘入华 王斌 朱元祺

雷极普罗威登菌属于肠杆菌目,是临床上重要的条件致病菌,可引起儿童或成人的泌尿道、呼吸道、伤口、脑脊液或血流的感染［1,2］。由于该菌对替加环素和多粘菌素天然耐药,一旦雷极普罗威登菌呈现产碳青霉烯酶,这将使临床医师对抗感染治疗药物的选择面临困难,甚至可能出现无药可用的局面［3］。因此,本研究对分离自患儿脑脊液感染的耐碳青霉烯类雷极普罗威登菌QD51 临床株利用PCR 和高通量测序对其耐药机制进行研究,现报告如下。

1 材料与方法

1.1 实验菌株 耐碳青霉烯类雷极普罗威登菌临床株QD51 于2014 年11 月分离自颅内感染患儿的脑脊液标本。电泳分子量标记的沙门菌H9812、药敏质控菌株ATCC25922 和质粒受体菌大肠埃希菌 J53AziR为本实验室保存。

1.2 实验仪器和试剂 细菌鉴定和药敏采用法国生物梅里埃VITEK-2 Compact 系统,药敏判定标准依据CLSI-2019［4］。美国BIO-RAD 公司的PCR 扩增仪、脉冲场电泳仪和凝胶成像系统。大连宝生生物的核酸分子量标准、琼脂糖和PCR 试剂。

1.3 扩增碳青霉烯酶基因 依据文献［5］依次扩增碳青霉烯酶耐药基因,生工(上海)生物工程有限公司完成引物合成和扩增产物测序。

1.4 质粒接合、S1-PFGE 参照文献［6］操作,电泳条件：转换时间0.3～45.0 s,转角120,场强6 V,电泳时间18 h。

1.5 质粒的高通量测序 基于Illumina MiSeq 和MinION 平台对接合子携带的质粒测序,然后,利用ResFinder 等软件分析质粒。

2 结果

2.1 碳青霉烯酶基因、质粒接合和药敏结果 PCR 扩增雷极普罗威登菌QD51 株的碳青霉烯酶基因,结果显示该株NDN 基因阳性,经测序比对为NDM-1 型,但其他碳青霉烯酶耐药基因未检测到。……