高 安，徐玉静，陆圣威，孙 蔚，甘建和

苏州大学附属第一医院 感染科，江苏 苏州 215000

慢加急性肝衰竭(ACLF)为慢性肝病基础上，短期内出现急性肝功能失代偿和肝衰竭的表现[1]。ACLF会导致肠道菌群失调、肠屏障功能受损、免疫功能下降[2]，越来越多的证据[3]说明慢性肝病与肠道菌群失调有关。近年来，肠道菌群在人体健康和疾病中起着至关重要的作用，并参与肠道内外慢性疾病的病理生理学[4]。基于肠肝轴理论，推测改善菌群失调对ACLF有保护意义，本实验通过建立ACLF小鼠模型，研究ACLF小鼠肠道菌群变化及粪菌移植(fecal microbiota transplantation，FMT)对ACLF小鼠的安全性及保护作用。

1 材料与方法

1.1 实验动物 选用40只SPF级雄性C57BL/6小鼠，3～4周龄，实验动物生产许可证编号为SCXK(苏)2018-0006。实验动物使用许可证编号为SYXK(苏)2017-0042。实验垫料、饲料经过辐照杀菌处理，饮用水经高压灭菌处理，符合SPF级动物使用标准，温度(24±2) ℃，湿度55%，小鼠自由摄取饲料和饮用水，光照与黑暗各12 h循环。

1.2 主要试剂 CCl4购自江苏强盛功能化学股份有限公司，橄榄油购自国药试剂网，D-氨基半乳糖(D-GalN)与脂多糖(LPS) 购自美国Sigma公司。

1.3 实验方法

1.3.1 ACLF小鼠模型建立 将40只小鼠按随机数字表法分为四组，每组10只。本研究采用CCl4联合D-GalN和LPS建立ACLF模型[5-6]。正常组(CON组)作为正常对照组进行观察。模型组(MOD组)小鼠按5 ml/kg腹腔注射20% CCl4(橄榄油稀释) ，2次/周，共12周，10 d后给予一次性腹腔联合注射(LPS 0.5 mg/kg、D-Gal 400 mg/kg)，建立ACLF模型，48 h后处死。粪菌移植组(FMT组)小鼠造模同MOD组，在第12周予以制备的正常组(CON组)小鼠粪菌液200 μl/只灌胃，持续3 d。模型小鼠粪菌移植组(ANFMT组)小鼠，在第12周予以制备的模型组(MOD组)小鼠粪菌液200 μl/只灌胃，持续3 d外。……