SOX9腺病毒过表达载体的构建及其对犬ADSCs向胰岛样细胞分化的影响
2021-06-19高登科戴鹏秀范志新阮晨梅王璟璐张欣珂张翊华
高登科,戴鹏秀,范志新,张 霞,阮晨梅,王璟璐,张欣珂,张翊华
(西北农林科技大学动物医学院,陕西 杨凌 712100)
糖尿病已成为继心血管疾病和肿瘤之后危害人和动物身体健康的第三大疾病,是犬常见的高发内分泌疾病,患病犬通常会出现高血糖和糖尿,并表现出多饮、多尿、多食和体重减轻等临床症状[1]。虽然外源性胰岛素治疗可以控制糖尿病的血糖升高,但无法防止血糖波动引起的微血管病变及并发症[2]。胰岛移植是治疗胰岛素依赖性糖尿病的理想方法,但因供体缺乏和免疫排斥而受阻[3]。因此,寻找一种更加高效、安全的糖尿病治疗方法是目前医学亟待解决的问题。
脂肪间充质干细胞(Adipose-derived mesenchymal stem cells,ADSCs)具有多向分化潜能,其不仅来源广泛,易于分离培养,而且移植后免疫原性低,对受体的淋巴细胞还具有免疫抑制能力,是治疗自身免疫损伤性糖尿病的理想种子细胞[4]。SOX9是内胚层发育和分化时期胰腺祖细胞的标志物之一,其对于维持胰腺祖细胞状态是必需的。McDonald等[5]研究发现,人胚胎胰岛上皮细胞敲除SOX9基因后胰岛素阳性细胞大量丢失,随后进一步试验发现,SOX9是以剂量依赖的方式调控祖细胞扩增、β细胞分化的,并且SOX9基因的表达量可以反映胰岛细胞增殖能力。但到目前为止,SOX9在ADSCs向胰岛样细胞分化过程中是否具有重要作用还是一个未知数。因此,本试验构建了腺病毒过表达重组载体pAdTrack-SOX9-AdEasy,并用获得了具有感染性的腺病毒毒液感染犬ADSCs ; 随后通过检测感染后的绿色荧光蛋白表达情况、细胞形态变化和胰岛β细胞发育相关基因的表达情况,探讨SOX9基因的过表达对犬ADSCs向胰岛样细胞分化的影响和意义,为进一步获得有功能的胰岛β细胞提供参考和依据。……
