倪丽艳 唐吉友

1.巨野县人民医院，山东 巨野 274900； 2.山东第一医科大学第一附属医院，山东 济南 250014

睡眠剥夺(sleep deprivation，SD)指由于环境或自身原因导致没有充足睡眠的一种状态，是现代社会的普遍现象。研究表明SD会降低人及实验动物的学习能力并损害记忆[1-3]。然而导致SD损害学习记忆的机制目前尚不完全清楚。Orexin-A是下丘脑外侧区分泌的一种神经肽，Orexin-A的重要作用是调节睡眠/觉醒[4]，睡眠剥夺可激活Orexin神经元[3,5]，正是由于Orexin的发现，失眠的概念由睡眠失调转为过度觉醒[6]。另有研究表明，Orexin-A与学习记忆密切相关[7]。

为进一步探讨下丘脑Orexin-A的变化在睡眠剥夺影响学习记忆中的作用，本研究中使用跑步机剥夺睡眠的方法使大鼠的非快速眼球运动(non-rapid eyes movement，NREM)和快速眼球运动(rapid eyes movement，REM)睡眠减少[8]，观察下丘脑Orexin-A的表达，并利用Morris水迷宫测试各组大鼠学习记忆能力。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1动物及分组

健康成年雄性 Wistar大鼠，质量(200±20)g，由山东济南朋悦实验动物有限公司提供。随机分为空白对照(CC)组、环境对照(TC)组、睡眠剥夺(SD)组。大鼠均在12 h光亮/黑暗条件、22～25 ℃环境温度下分笼喂养。

1.1.2主要试剂与仪器

水迷宫设备(北京众实迪创科技发展有限公司)；跑步机(ZH-PT型多功能跑台系统，安徽正华生物仪器设备有限公司)；显微镜(OLYMPUS，日本)。兔抗 Orexin-A多克隆抗体(Cell Signaling Technology，CST)，山羊抗兔IgG二抗试剂盒(北京中杉金桥生物技术有限公司)。

1.2 试验方法

1.2.1睡眠剥夺

采用间歇式跑步机系统对大鼠进行72 h全睡眠剥夺，跑步机的传送带上方0.6 cm处为有机玻璃分隔成大小相等的鼠笼(28 cm×28 cm×40 cm)，笼顶扣上栅栏式鼠笼盖，可放置饲料和水瓶，跑步机的传送带形成鼠笼的底。……