刘 群，王 菁，刘桐山，王 钢，韩进刚，冯守明

(1.天津市动物疫病预防控制中心，天津 300402；2.天津市水产研究所，天津 300221)

锦鲤昏睡病(KSD)具有发病率高、死亡率高的特点，且呈现逐年上升态势。本研究应用流行病学调查、病理学观察、分子生物学检测等多种方法对天津地区一养殖场不明原因锦鲤死亡病例进行诊断及分析，确诊为由鲤浮肿病毒(Car p edema vir us，CEV)感染引起的锦鲤昏睡病(KSD)。现将其实验室诊断与分析结果报道如下。

一、材料与方法

1.样品取样

疾病暴发时，深入现场调查养殖水温、养殖密度、鱼龄、发病率、死亡率等情况，观察病鱼活动状态。取症状典型的发病鱼活体置于解剖盘中，检查其体表症状，解剖并剪取鳃、肝胰脏、脾、肾、脑组织，用于组织病理观察的组织块(不超过0.5厘米3)置于Davidson's AFA固定液固定；用于超微病理观察的组织块(厚度小于2毫米)置于TEM电镜固定液中固定，并做好记录。

2.寄生虫检查

观察病鱼活动情况，用显微镜检查病鱼有无寄生虫。鳃丝、体表黏液采取水浸片法，脑、肝胰脏、脾、肾组织采用压片法，血液用涂片法。制片后置于显微镜下观察发病鱼体表、鳃和其他内脏组织病变情况。

3.石蜡切片制备与观察

用于组织病理观察的组织块固定24小时后置于70%(体积分数)乙醇，浸泡36小时后即可制备病理切片。经脱水、浸蜡、石蜡包埋、切片、展片、烤片、脱蜡、染色、封片等步骤后，使用ZEISS光学显微镜对制备好的病理切片进行显微观察，并用Axio Cam数字摄像头结合Axio Vision图像分析软件进行拍照和测量。……